Burada astrositik G-protein bağlı reseptörlerin plastisite çalışma için nöronlarda homeostatik plastisite indüklemek için kullanılan protokol bir uyarlama tarif eder. En son astrositik grubu çocuk farelerde I mGluR'leri değişiklikleri incelemek için kullanılan yöntem, in situ ve in vivo olarak erişkin farelerden dokuda çeşitli astrositik GPCRs ölçekleme ölçülmesi ve astrositik reseptörlerinin duyarlılığının daha iyi takdir elde etmek için uygulanabilir nöronal aktivite değişikliklere.
Araştırmanın iki yıl yakın in situ ve in vivo olarak astrositleri nöronal serbest bırakılan verici tarafından teşvik edilebilir çok sayıda G protein-eşli reseptörü (GPCR'ler) ifade eden oluşturmuştur. Ancak nöron aktivitesi değişikliklere yanıt olarak plastisite sergilemek astrositik reseptörlerinin yeteneği çok az dikkat çekmiştir. Burada küresel büyütmek veya Astrositik grup aşağı ben akut beyin dilimleri glutamat reseptörleri (mGluR'ler) metabotropik için kullanılabilecek bir model sistemi tanımlar. Dahil çift yönlü floresan Ca 2 + göstergesi ile nöronal aksiyon potansiyeli frekansı, yük astrositleri ve astrocyte süreçlerini işlemek, uzun vadeli dilim inkübasyon için uygun odaları oluşturmak, parasagital hipokampal dilimleri hazırlamak ve kayıt ile Astrositik Gq GPCR'dir aktivite değişikliklerini ölçmek için nasıl yöntemler konfokal mikroskopi kullanılarak spontan ve uyarılmış astrocyte Ca 2 + olaylar. Aslında, bir "kalsiyum roadmap "astrositik Gq GPCRs esnekliğini ölçmek için nasıl sağlanmaz. Astrositlerin çalışma için tekniğin uygulamaları tartışılmıştır. Astrositik reseptör sinyal nöronal aktivitedeki değişimlere etkilenir nasıl bir anlayış olması hem normal sinaptik fonksiyonu yanı sıra işlemler altta yatan nörolojik bozukluklar ve nörodejeneratif hastalık için önemli etkileri vardır.
Astrositler 2 + astrositik Gq GPCRs aktivasyonundan hemen hemen tamamen edilen Sitoplazmik Ca artışlar nöronlar ya da nöronal aksonlarının uyarılmasından saniye içinde yanıt verir. Örneğin muskarinik asetilkolin reseptörleri 1, kanabinoid reseptörleri 2, α 1A adrenerjik reseptörler, 3, 4, ve Grup I mGluR'ler (aşağıya bakınız) akut nöron aktivitesi yanıt her astrositik Gq GPCR alt-tipleridir. Astrositik Grup I mGluR'leri aktivasyonu (örneğin, akut hipokampal dilimler gibi) in situ nöronal glutamaterjik sinirlerin uyarılmasıyla 5-7, hem de in vivo olarak yetişkin fare korteksteki sensor uyarılması 8 takip ediyor, en yaygın olarak gösterilmiştir. Biyoloji ve astrositlerde, nöronlar, ya astrosit nöron etkileşimlerinin fizyolojisi üzerinde sinyalizasyon astrositik Gq GPCR'nin aktivasyonu sonucu tartışma 9-12 meselesi olmuştur. Bu s olacaknöron-to-astrosit reseptör sinyalizasyon işlevi önce ome zaman tam olarak takdir edilmektedir.
Bu nöronlar deneysel protokolleri kullanarak Astrositik reseptörleri aktive açıktır iken, yeterince anlaşılamamıştır kalması nöron-to-astrosit reseptör iletişim yönleri vardır. Birincisi, astrositik Gq GPCR'ler etkinleştirmek için gerekli nöronal aktivitenin gerçek miktarı iyi tanımlanmış değildir, ve ikinci, kullanım-bağımlı plastisite sergilemek astrositik reseptörlerinin yeteneği az ilgi gördü. Bu soruları başlamak için, biz son zamanlarda nöronal hareket potansiyelinin uzun vadeli değişiklikler (AP)-bağımlı sinaptik aktivite cevaben Astrositik grubunda akut çocuk hipokampal dilimleri ben mGluR'ler iki yönlü ölçekleme ikna etmek için bir protokol geliştirmiştir. I mGluR'leri fo büyütmek nöronal iyonotropik glutamat reseptörlerinin, 13, 14, astrositik grubunun çift yönlü homeostatik plastisite için keşfedilmiştir ne benzerllowing nöronal hareket potansiyelinin abluka ve nöronal aksiyon potansiyeli frekansı 15 arttığında küçültün. Astrositik reseptörleri bu telafi edici değişiklikler kendiliğinden kaydederek ölçülür ve astrocyte Ca 2 + transientleri uyarılmış ve kontrol koşullarında astrositlerden olanlara bu olayların özelliklerini karşılaştırarak edilebilir. Bu yazıda, astrosit reseptör ölçekleme uyardığı akut hipokampal dilimleri, inkübasyon koşullarının hazırlanması da dahil olmak üzere, bu protokolün kullanımı için tam bir metodoloji tarif astrosit Ca 2 + göstergesi boya yükleme, Ca 2 + görüntüleme konfokal mikroskopi kullanılarak teknikleri ve beklenen etkiler astrocyte Gq GPCR aktivite. Astrosit üzerinde öngörülebilir etkileri Ca2 + sinyali özellikleri – Gq GPCRs farklı ekspresyon seviyeleri ile transfekte edilmiş kültürlenmiş hücrelerde daha önce kaydedilmiş eşleşen – olarak değişiklikler için tahlil sonraki çalışmalarda kullanılabilecek bir "yol haritası" sağlartrocytic GPCR ifade. Bu tekniğin kullanımı için etkileri ve potansiyel uygulamalar, sağlıklı ve hastalıklı beyin astrosit-nöronal etkileşimlerinin anlaşılmasına katkıda bulunacaktır.
Tarif ölçeklendirme modelleri Astrositik grup mGluR'lerinin uzun vadeli plastisite araştırmak için pratik yöntemleri temsil eder. Görüntüleme spontan ve uyarılmış Ca 2 + olaylar, sağlam kanıtlar astrosit Ca 2 + yükselmeler Gq GPCR'dir aktivasyon 10 mansap IP 3 R-duyarlı mağazalardan salıverilmesinin ardından meydana tespit edildiği gibi, Astrositik Gq GPCR'dir aktivite değişiklikleri ölçmek için hassas bir tahlil sağlar 12, 17, 18. Nüfus astrositlerin yüzdesi grup I mGluR agonisti ve bu Ca2 + tepkilerinin desen yanıt astrositler tarafından Grup I mGluR'leri değişiklikleri rapor etmektedir.
Ca 2 + göstergesi ile astrositler yüklemek için kullanılan özel teknik, astrositik Gq GPCR aktivitedeki değişiklikler için deney tasarımında önemli bir husustur. Bolus-yükleme veya toplu yükleme birden astrositleri, veya pBireysel astrositlerin atch klemp yükleme astrositlerde görüntü Ca 2 + geçici için kullanılabilir. Her yaklaşımın bazı avantajları ve dezavantajları bulunmaktadır. Doğrudan yama kelepçe ile Ca 2 + göstergeli astrositler doldurma gibi SR-101 gibi sekonder bir marker için gerek kalmadan bir astrosit olarak hücrenin açık belirlenmesini sağlar. Göstergenin Patch-kelepçe teslimat da hücreler sağlıklı dilim ve sinapsların (mevcut lazer gücüne bağlı olarak) daha sağlam etkileşimler ile potansiyel derin gür ince süreçlerin, dahil olmak üzere küçük Astrositik bölmelerden Ca 2 + aktivite kayıt sağlar. Veriler her seferinde bir hücre toplanır Ancak, patch-clamp yükleme düşük verim uğrar. Bulk-yükleme, aksine, astrositlerin, çok sayıda Ca 2 + göstergesi ile yüklenir ve aynı anda görüntülü sağlar. Ancak, astrositler yüzeye yakın dilimin (<20 um) bağlı bir endişe ile yüklenirhücre sağlığı ve sağlam sinapsların hakkında s.
Burada sunulan backpressureyi bolus yükleme protokolü nispeten yüksek verim ve dilim (40-75 mikron) içindeki derin Ca 2 + etkinliğini izlemek için yeteneği ile, bir orta yol sunuyor. Bolus yükleme tekniği kullanılarak kendiliğinden aktif astrositlerin yüzdesinde önemli bir artış ve nöronal sinapsların, astrositik proseslerde arasındaki bağlantı 15 daha eksiksiz olduğunu düşündürmektedir, kütle-yük ile karşılaştırıldığında görülmektedir. Iyi bir yükleme ile, sık sık 2-foton mikroskopi kullanılarak astrositler (veriler gösterilmemiştir) veya potansiyel olarak daha da küçük bölmelerin ana işlemlerinde Ca 2 + etkinliğini izlemek için. Ancak, bakım sınırları spesifik olmayan arka plan boyama içine karıştırmak gibi, belirli bir astrosit için küçük süreçleri atama icra edilmesi gerekir. Kütle-yük ya da yükleme bolus prosedürlerin kullanılması ile ek bir sorun, bir ikinci mar için ihtiyaçastrosit tanımlanması için ker. Bu, tercihen astrositler Ca 2 + göstergeleri AM ester almak birçok yıldan beri bilinmektedir olsa da, ikinci işaretleyici SR-101, genellikle astrositler olarak yüklenmiş hücreler doğrulamak için kullanılır. SR-101 kendi nöronların 29'un iç heyecanlanma değiştirebilir. SR-101 kullanımı sinirsel uyarıların mümkün SR-101 etkilerini sınırlamak için ttx tüm astrocyte Ca 2 + ölçümleri gerçekleştirmek için ihtiyaç corroborates. Kontrol ve deney grubu hem de SR-101 dahil olduğu varsayılarak, tek başına markör nöronal aksiyon potansiyellerinin, uzun süreli manipülasyona aşağıdaki astrosit Ca 2 + sinyal gözlenen etkilerin hesaba olmamalıdır. O 2,5 mM K + vs arasındaki farkı azaltabilir olarak SR-101, ancak, yüksek K + deneylerde bir endişe daha fazla olabilir 5.0 mM K + bazal ateşleme hızı orantılı değilse.
Ca 2 + sunmak için çok umut verici bir yaklaşım </sup> Astrositlere gösterge Ca 2 + boyalar kullanarak daha geleneksel yaklaşımlara cazip bir alternatif sunduğu son zamanlarda ortaya çıkmıştır. Önemli gelişmeler astrositlere 30-32 hedeflenen genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergeleri (GeCIS) ile son yıllarda yapılmıştır. GeCIS hipokampus gibi ilgi konusu bir beyin bölgesine adeno-ilişkili viral vektörler in vivo mikroenjeksiyon ile astrositler teslim edilebilir. GeCIS ekspresyonu viral enfeksiyon 32 takip eden yaklaşık iki hafta sonra elde edilir. Astrositlerde GeCIS kullanılmasıyla sunulan pek çok avantajı vardır. İlk olarak, vektör, bir astrosit-özgü promoteri kullanılarak astrositleri hedef, bu etiketlenmiş hücrelerin astrosit 32 vardır. İkincisi, sinyal-gürültü ama şimdi hücrede 32 bir yama pipet geçirdiğine invaziflik olmadan, boya yama kelepçe teslim kullanılarak elde edilebilir ne karşılaştırılabilir görünüyor. Üçüncü olarak, göstergeler del olabilirivered ve toplu yükleme dağıtım yöntemlerini kullanarak sorunlu yetişkin doku olarak ifade edilmiştir. Ayrıca, ifade birden astrositlere arasında ayrım yeteneği sunan mozaik olduğunu. Aynı zamanda soma ve ince branchlets kayıt Böylece, çeşitli potansiyel olarak astrositler, eş zamanlı olarak görüntülenebilir. Bu nedenle, potansiyel olarak tek bir tekniği büyük ölçüde verimliliği artırarak, astrositik Gq GPCRs ölçekleme aktivitesini kaydetmek için üç ayrı teknikler (toplu yükleme, bolus-yükleme ve patch-kelepçe yükleme) yerine kullanılabilir.
Astrositlere Ca 2 + göstergelerin viral aracılı teslim kullanarak bir potansiyel dezavantajı dilim sağlık 32 olası etkisidir. GeCIS sunmak için kullanılan adeno-ilişkili viral vektörler astrositlerin 33 arasında reaktif gliozis neden olduğu daha önce gösterilmiştir. Genel olarak beyin dilimleri hazırlanması muhtemel enf sürümü de dahil olmak üzere patoloji erken aşamalarında başlatırlammatory 10 molekülleri. Bu nedenle, GeCIS kullanımı viral vektörler kullanılarak teslim astrositik reseptörlerinin ölçekleme indüklemek için gerekli olan uzun inkübasyon süreleri, deney ile birlikte bu tür dilim sağlık bağlamında ek dikkate almak gerekir.
Bu protokolü kullanarak, bu bir yanıt üretmek için agonist için uygulama süresi reseptör durumu bir fonksiyonu olarak değişir akılda tutmak önemlidir. Agonistin, belirli bir konsantrasyonu için, uygulama süresi reseptörleri küçültülmüş ve daha kısa olması durumunda reseptörlerin bir Ca 2 + üretmek için yeterli reseptörleri aktif hale getirmek için yeterli bir doku konsantrasyonu elde etmek üzere, ilaç için, yukarı ölçeklenmiş daha uzun olması gerekir yanıtı. Bu nedenle, ilaç uygulama süreleri ve potansiyel konsantrasyonları, ölçekleme amaçlanan yönüne bağlı olarak ayarlanması gerekebilir. Örneğin, agonist konsantrasyonu c düşürülebilir gerekebilirTTX ve ase yanıtları doyurarak önlemek, ve hatta bir yanıt görmek için yüksek K + dilimleri beklettikten sonra artmış. Özel olarak, DHPG konsantrasyonu 5-15 uM genellikle güvenilir yanıtları üretmek için çok düşük olduğu gibi, Ca2 + cevabı desen çalışması için 5.0 mM K + tedavi sonrası 30-50 uM TTX tedavi sonrası 5-15 uM kaymıştır grup mGluR'lerinin küçültmeden sonra astrositlere.
Astrosit Ca 2 + faaliyet kaydı plazma zarına veya ikinci reseptör ekleme ya da interne etme doğrudan bir kanıt sağlar. Ancak, Gq GPCR'dir ifade seviyeleri ve spontan arasında doğrudan bir ilişki incelenmiş ve Ca 2 + geçişlerini 21-24, Ca 2 + değişikliklerin en mantıklı yorumunu uyarılmış vitro önceki çalışmalarından elde edilen veriler ile veri olağanüstü benzerliğe göre sinyal astrosit yüzey reseptör ekspresyon seviyeleri olmasıdırdeğiştirdi. Bir Ca 2 + aktivitesi üzerindeki etkisi mahaline hakkında ek delil sağlamak istiyorsa bir tamamlayıcı bir yaklaşım önemli bir husus olabilir. Biz kullanılan bir strateji Astrositik MrgA1R farelerin hipokampal dilimleri TTX inkübasyon etkisini araştırmaktır. Bu transgenik fareler, sadece astrositlerde yabancı Gq GPCR (MrgA1R) ifade eder. Bu reseptör beyne yerel olduğu için, aktivitesi düzeylerini değiştirmek için mevcut herhangi bir endojen nörotransmiter yoktur. Önceki çalışmalar bu reseptör aynı astrositler 34 endojen Grup I mGluR'leri olarak sinyal molekülleri ile aynı hücre içi angaje önerdi. TTX in MrgA1R farelerden dilimlerinin sonra uzun süreli inkübasyon, yavru kontrole kıyasla agonist ile uyarılan MrgA1R yanıtlarında bir fark, dilimler astrosit üzerindeki etkisi Ca 2 + aktivitesi yüzey reseptörüne lokalize değişiklikler nedeniyle olduğuna dair kanıt sağlayacak kuluçkalanmıştır Özellikle grup I mGluR'daki cevapları hala anlaml iseicantly aynı astrositler geliştirilmiştir. Alternatif bir, belki daha fazla yer strateji sürece bir membran fraksiyonu yüzey reseptör ekspresyon seviyelerindeki değişiklikler için analiz edilebilir olarak, Western blot analizi için kesitlerden izole astrositler olacaktır bile. Floresan Aktif Hücre Sıralama (FACS) veya akım sitometri burada yararlı olabilir.
Nöronların çalışma için bu tekniğin olası uygulamaları, astrositler ve astrosit-nöronal etkileşimleri çoktur. Deneylerde, sadece DHPG uyarılmış grup I astrositik Ca2 + tepkileri çocuk farelerden izole, akut hipokampal dilimlerde, mGluR çalışıldı. Bu hazırlık, sağlam afferentleri (Schaffer kollateral), ama aynı zamanda onları (CA3 piramidal hücreler) doğuran nöronlar vardır mümkün postsinaptik hücreleri (CA1 piramidal hücreleri) üzerine bu Glutamaterjik nöronların ateşleme oranlarını manipüle yapma ve sadece olan işlemler associat stratum radiatum astrositlerBu sinapsların ile e. Akut hipokampal nöronlarının dilim diğer tip ateşleme oranlarını değiştirmek için en iyi preparat olabilir, bununla birlikte, pek çok afferentler onlara yol nöronların koparılır. Bununla birlikte, diğer astrositik Gq GPCR alt tiplerinin plastisite gözlemlemek için bazı slice preparatlarda mümkün olabilir. Örneğin, dilim sağlam hipokampta bazal ön beyin kolinerjik nöronlarının ve projeksiyonları ile hazırlanabilir. TTX veya yüksek K +, bu dilimlerin Kuluçka kolinerjik giriş 1 önemli bir kısmını almak stratum Oriens'in astrositlerde, içinde mAChRs'sini ölçeklendirilmesidir açan, kolinerjik nöronlar bazal ateşleme oranlarını etkileyecektir. Alternatif bir ölçekleme oluşur, TTX bir salıverilme plast implantasyonu ile elde edilir bir in vivo model kullanmak olabilir bozulmamış tüm bağlantıları ile beynin belirli bir alanda astrositik reseptör ölçekleme, çalışma henüz denenmemiş bir yaklaşımic polimer Elvax 40W ilgi 35 bölge üzerindedir. Bu yaklaşım nöronal ölçekleme bir çalışmada daha önceden kullanılmış olan ama aynı zamanda Astrositik ölçekleme için geçerli olmalıdır. Son olarak, uygun okuma ile, gelecekteki çalışmalarda G ler ya da G i GPCRs değişiklikler dahil olmak üzere diğer GPCR'dir aileleri, incelemek olabilir. Bir i GPCR'ler lokal olarak herhangi bir dilim hazırlık içinde GABA internöronlardan projelendirme ateş engellenmesi aşağıdaki etkilenecek Astrositik GABA B G tahmin olabilir. Böyle ikinci haberci cAMP bir gerçek zamanlı gösterge olarak diğer sinyal molekülleri hedefleyen yeni göstergeler geliştirilmesi, nöron-to-astrosit reseptör iletişim araştırma tamamen yeni bir alan açmak istiyorum.
Bazal nöron atış oranları manipülasyonu ile astrositik mGluR'lerin Çift yönlü ölçekleme nörotransmitter AP-aracılı serbest bırakmak için astrositlerin duyarlılık bir ölçüsünü sağlar. Astrositler görünüşte kendiliğinden APleri ve glutamat hissedebiliyorumekstrasellüler K + fizyolojik bir aralıkta olsa Schaffer kollateral-CA1 piramidal hücre sinapslarında te bırakma. TTX akut uygulama kendiliğinden astrosit sıklığını astrositik reseptörleri AP dedektörleri olduğuna dair kanıtlar temin Ca 2 + aktivitesi 18, 36, 37, 36 olur ilintisiz popülasyondaki astrositler arasındaki Ca 2 + aktivitesi, azaltmaz iken. Bu astrocytes hiçbir genel Ca 2 + aktivite üzerindeki etkisi ile spontan nöronal APleri anlamda düşündürmektedir. Bu yaygın IP 3 hücre içi konsantrasyonları tespit edilebilir bir Ca2 + yükselmesi yol açmak için yeterli IP 3 Rs teşvik etmek için bir eşik seviyesine ulaşmak için ihtiyaç olduğu kabul edilmektedir. Spontan nöronal AP ölçülebilir Ca 2 + yükselmeleri üretmeden Astrositik GPCR'ler aktive misiniz? Gelecek çalışmalar Floresan Rezonans Enerji Transferi (FRET) veya benzer bir techn kullanmak olabilir alıcısına G protein bağlama (reseptör aktivasyonunun bir ölçütü) ve iç depolar Ca 2 + bırakılması arasındaki ilişkinin incelenmesi için (örneğin, BRET gibi) ique. Bu teknoloji, bozulmamış doku preparasyonlarda kullanıma hazır olmadan önce bir süre olabilir, ancak BRET, G protein-to-GPCR kuplajı 38, in vitro olarak tespit etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu Astrositik Gq GPCR'ler çok daha sık mevcut Ca 2 + görüntüleme araçlarını kullanarak kaydedilebilir daha aktive ediliyor mümkündür. Aksiyon potansiyelleri algılama ek olarak, astrositik Gq GPCR'ler da bir çalışmada 39 de belirtildiği gibi nörotransmiter minyatür quantal salınımını tespit etmek mümkün olabilir. Burada anlatılan iki yönlü ölçekleme yöntemi Astrositik Gq GPCR'ler kuluçka protokolde bafilomisin A1 dahil ederek nörotransmiter quantal veziküler salınımını tespit ölçüde bir ölçü sağlamak için gelecekteki çalışmalarda kullanılabilir.
Astrositik reseptör ölçekleme de yetişkin farelerden elde edilen doku kaynaklı olabilir eğer ntent "> Bugüne kadar, ölçeklendirme protokolleri sadece çocuk farelerin (p12-p18) hipokampal dilimleri kullanılmıştır. Dolayısıyla halen bilinmemektedir. bir zorlayıcı yeni bir çalışma astrositlerde grup I mGluR'daki ifade çağın ilk haftadan sonra önemli ölçüde azalır ve yetişkin astrositlerde 40 reseptör ifadesi çok düşük seviyelerde, yetişkinliğe kadar azalmaya devam ediyor. Bu nedenle Astrositik mGluR'ler aşağıdaki büyütmek olmadığını belirlemek için ilginç olacağını gösteriyor uzun genç farelerin astrositlerde görülen yaklaşan düzeylere yetişkin fare hipokampal dilimleri nöronal ateşleme süreli engellenmesi. Bu bulgu Astrositik reseptör ifadenin belirli bir yaşta statik değil, nöronal aktivitenin seviyelerine bağlı olarak hızla değişebilir öneririz. aksine yetişkin farelerde grup mGluR'lerinin azaltılmış ifadesi, delil dahil & # o adrenerjik reseptörleri ortaya çıkıyor945; 1A, 2A α ve β alt tipleri 1, ağırlıklı olarak, yetişkin beyin 3, 4 ve astrositler tarafından ifade edilmiştir. Α 1A adrenerjik Gq GPCR'dir bu reseptörlerin adrenerjik nöron ateşleme hızlarındaki değişikliklere duyarlı olup olmadığı dahil nöron-to-astrosit iletişimin gelecekteki çalışmalar için çekici bir hedef olabilir.The authors have nothing to disclose.
Yazarlar ölçekleme protokolleri ve veri değerli tartışma için glial-Nöronal Etkileşimleri UC Riverside Merkezi'ni kabul etmek istiyorum. Yazarlar ayrıca, yaptıkları işin yayın sponsor Abcam'dan için samimi ederiz size vermek istiyorum.
Chamber Supplies | |||
Brinkmann pipette storage container | Fisher Scientific | 03-491 | Use the drawer portion as the incubation chamber |
Electrical drill | |||
Flexible tubing | Tygon | R-3603 | |
Silicone seam sealant | Also called aquarium seam sealer | ||
Gas tank | 95% oxygen, 5% carbon dioxide | ||
Natural beveled pipette tip | USA Scientific | 1111-1000 | Cut-to-fit to connect oxygenate lines |
One-to-six lines manifold | Warner Instruments | 64-0210 (MP-6) | For the microloader-manifold apparatus |
Eppendorf microloader | Eppendorf | 5242 956.003 | For the microloader-manifold apparatus, cut-to-fit |
Floating Bubble Rack | Bel Art Scienceware | F18875-0400 | For slice holder |
600 micron Sefar Nitex nylon mesh | ELKO filtering Co. | 06-600/51 | For slice holder |
Krazy Glue | For slice holder | ||
Reagent | |||
Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
NaCl | Fisher | S271-3 | |
KCl | Fisher | P333-500 | |
CaCl2 | Fisher | C79-500 | |
MgCl2 | Fisher | M33-500 | |
NaH2PO4 | Fisher | S369-500 | |
NaHCO3 | Fisher | S233-500 | |
Glucose | Fisher | Fisher | |
(±)-6-Hydroxy-2,5,7,8- tetramethylchromane-2-carboxylic acid (Trolox) | Acros Organics | 53188-07-1 | |
Ascorbic acid | Acros Organics | 401471000 | |
Tetrodotoxin citrate (TTX) | Ascent Scientific | Asc-055 | |
Sulforhodamine 101 (SR-101) | Sigma-Aldrich | 284912 | |
Dimethyl Sulfoxide (DMSO) | Fisher Scientific | D128-500 | |
Pluronic Acid F-127 | Invitrogen, Molecular Probes | P6867 | |
Oregon Green 488 BAPTA-1 AM *cell permeant (special packaging) | Invitrogen, Molecular Probes | O6807 | |
(RS)-3,5-DHPG | Ascent | Asc-020 | |
Histamine | Sigma-Aldrich | H7125 | |
Carbamoylcholine chloride (Carbachol) | Sigma-Aldrich | C4382 | |
Adenosine 5’-ATP disodium (Na-ATP) | Sigma-Aldrich | A7699 | |
Dissection Tools | |||
Single-edge razor blade | GEM | 62-0161 | For bisection |
Double edge razor blade | TED PELLA, INC. | 121-6 | For cutting slices |
Mayo Scissors, supercut | WPI | 14010-15 | For decapitation |
Fine iris scissors, straight | Fine Science Tools | 14094-11 | For cutting the skull |
Iris forceps, curved | WPI | 15915 | To remove the skin and skull |
Small spatula | To remove/transfer the brain | ||
Dumostar Dumont #5 Biologie Tip forceps | Fine Science Tools | 11295-10 | For hippocampus dissection |
Glass Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20B | For transferring brain slices |
Pasteur pipette rubber bulb | Fisher | 03-448-22 | For transferring brain slices |
Polystyrene 100-mm tissue culture dishes | Corning | 25020 | |
Equipment | |||
Vibratome | Leica | VT 1200S | |
Water bath | Fisher | ISOTEMP 210 | For warm incubation |
Micropipette puller | Narishige | PC-10 | For bolus-loading pipette |
Confocal microscope | Olympus | Olympus Fluoview 1000 | |
Low Profile Open Diamond Bath Imaging Chamber with PM-1 platform | Warner Instruments | RC-26GLP | diamond bath with low profile |
Borosilicate glass pipette | World Precision Instruments | TW150F-4 | For bolus-loading pipette |
Micromanipulator | Sutter instrument | ROE-200 | For bolus-loading pipette |
Spin-X centrifuge tube filter with 0.22 µm cellulose acetate | Costar | 8161 |