Miografia pressão é utilizado para avaliar a vasoactividade das pequenas artérias que se desenvolvem constrição prolongada quando pressurizado. Este manuscrito proporciona um protocolo detalhado para avaliar em segmentos isolados de pequenas artérias mesentéricas de ratos, vasoactividade e o efeito da pressão intraluminal no diâmetro vascular.
Artérias resistência pequena constrição e dilatar, respectivamente, em resposta ao aumento ou diminuição da pressão intraluminal; este fenómeno conhecido como resposta miogénica é um regulador chave do fluxo sanguíneo local. Em condições isobáricas artérias de resistência pequenas desenvolverem elevações contínuas constrição conhecida como tom miogênica (MT), que é um dos principais determinantes da resistência vascular sistêmica (RVS). Daí, ex vivo preparações pressurizados das artérias de resistência pequenas são as principais ferramentas para estudar função microvascular em estados próximos a-fisiológica. Para alcançar este objectivo, um segmento intacto isolada de fresco de uma artéria pequena resistência (diâmetro ~ 260 uM) está montada em duas cânulas de vidro pequenas e pressurizado. Estas preparações arteriais reter mais características in vivo e avaliação de autorização do tônus vascular em tempo real. Aqui nós fornecemos um protocolo detalhado para avaliar vasoactividade em pressurizados pequenas artérias mesentéricas de resistência de ratos; estas artérias desenvolvervasoconstrição sustentada – cerca de 25% do diâmetro máximo – quando pressurizado a 70 mmHg. Estas preparações arteriais pode ser utilizada para estudar o efeito dos compostos experimentais na relação entre a pressão intra-arterial e vasoactividade e determinar alterações na função microvascular em modelos animais de várias doenças.
Pequenas artérias de resistência são os principais determinantes do SVR e desempenham um papel importante na fisiopatologia de muitas doenças 1,2. Condições como a diabetes 3, 4 a gravidez, de isquemia-reperfusão 5, obesidade e hipertensão 6,7 são frequentemente associados com a função microvascular alterada. Miografia vascular pode não só fornecer importantes insights sobre mudanças na função microvascular em várias doenças, mas também ajudar a identificar alvos terapêuticos e avaliar a eficácia dos compostos vasoativas. Função vascular foi estudada usando isoladas pequenas artérias em condições de vasos isométricos ou isobáricas 8. Descrição detalhada do Miografia isométrica é fornecido em outros lugares 9. No entanto, existem diferenças nos dados obtidos a partir de preparações contra isométrica isobáricas 10-12. Desde preparações arteriais pressurizados permitir o estudo da função microvascular em condições de quase-fisiológicas, aresultados obtidos podem correlacionar melhor com o comportamento in vivo do leito vascular 8,13.
Em 1902 Bayliss descreveu pela primeira vez o efeito da pressão transmural do diâmetro vascular 14. Ele observada em artérias de resistência pequenas de vários leitos vasculares de coelhos, gatos e cães que uma diminuição na pressão foi seguido por vasodilatação, e um aumento da pressão foi seguido por vasoconstrição. Este fenômeno é conhecido como resposta miogênica. Bayliss e investigadores subseqüentes observou que, em condições isobáricas artérias pequena resistência desenvolver constrição sustentado conhecida como MT 15,16. Tanto a resposta miogénica e MT pode ser avaliada usando Miografia pressão (PM) técnica. PM é usado principalmente para determinar vasoactividade de pequenas artérias, veias e outros recipientes. Além de avaliar o efeito dos compostos vasoativos no diâmetro vascular, PM – como o nome indica – é utilizado para avaliar ch mediada por pressão intravascularanges do diâmetro vascular. Ao longo das últimas décadas os avanços em software de computador, o que aprimorou microscopia de vídeo e pipeta de vidro puxando, fizeram PM mais fácil de executar. No entanto, a dissecção de segmentos intactas viáveis de pequenos vasos sanguíneos continua a ser tedioso e às vezes desafiador. Aqui destacamos um protocolo detalhado para estudar resposta miogênica em pequenas artérias mesentéricas de resistência isolados de ratos.
Passos crítico, resolução de problemas e modificações
Numa preparação típica vaso isobárica, a artéria é pressurizado a 70 mmHg entre duas cânulas de vidro perfundidos com água morna (37 ° C) PSS. Após 30-45 min, artérias desenvolver MT, caracterizado por diminuição espontânea de diâmetro que se estabiliza em 20-30 min. As artérias de resistência de vários leitos vasculares desenvolver MT variável. Por exemplo resistência rato artéria mesentérica desenvolver MT ~ 25% …
The authors have nothing to disclose.
Sandeep Khurana é suportado pelo NIH (K08DKO81479). Vikrant Rachakonda é suportado por (T32DK067872).
Chemical | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Acetylcholine | Sigma Aldrich | A6625 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Calcium chloride (CaCl2) | Sigma Aldrich | 223506 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
D-(+)-Glucose | Sigma Aldrich | G5767 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N’,N’-tetra acetic acid (EGTA) | Sigma Aldrich | E3889 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) | Sigma Aldrich | E9884 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
HEPES | Sigma Aldrich | H3784 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Magnesium sulfate (MgSO4) | Sigma Aldrich | M7506 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
MOPS | Sigma Aldrich | M5162 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Phenylephrine | Sigma Aldrich | P6126 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Potassium chloride (KCl) | Sigma Aldrich | P3911 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma Aldrich | P5655 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium bicarbonate (NaHCO3 ) | Sigma Aldrich | S6014 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium chloride (NaCl) | Sigma Aldrich | S7653 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium hydroxide (NaOH) | Sigma Aldrich | S5881 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium nitroprusside | Sigma Aldrich | 13451 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4) | Sigma Aldrich | S9638 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium pyruvate | Sigma Aldrich | P8574 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Table 1. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Table 2. Composition of Experimetnal solutions | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Equipment | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CCD Monochrome Camera | The imaging Source | DMK 21AU04 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Single inline solution heater | Warner Instruments | 64-0102 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Thermistor | Warner Instruments | 64-0108 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Dual automatic temperature controller | Warner Instruments | TC-344B | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Flaming/Brown micropipette puller | Sutter Instruments | P-97 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Fluorescence System Interface | IonOptix | model FSI-700 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Forceps and scissors | World Precision Instruments | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ion Wizard-Core and Analysis | IonOptix | Ion Wizard 6.0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Laboratory tubing | Silastic | 508-005 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Male Sprague Dawley rat | Harlan Laboratories | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Master flex console drive | Cole-parmer | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Milli-Q Plus Ultrapure Water System | Millipore | ZD5211584 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ophthalmic monofilament nylon suture | Ethicon | 9007G | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Photometry and Dimensioning Microscope | Motic | AE31 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer | Living Systems Instrumentation | PS-200 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Stereomicroscope | Nikon Instruments Inc | SMZ660 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Vessel Chamber | Living Systems Instrumentation | CH-1 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Dissection dish | Living Systems Instrumentation | DD-90-S | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Thin Wall Glass Capillaries | World Precision Instruments | TW120-6 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Microforge | Stoelting | 51550 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Table 3. |