ووصف طريقة مرحلتين لإنشاء مرض الكلى المزمن (كد) في الفئران لويس عن طريق إزالة جراحيا 5/6th من كتلة الكلوي. مزيج من إجراء العمليات الجراحية، NOS-تثبيط واتباع نظام غذائي غني بالملح يؤدي إلى نموذج يشبه كد الإنسان، والسماح دراسة الآليات السببية وتطوير تدخلات علاجية جديدة.
مرض مزمن في الكلى (كد) هو مشكلة عالمية. تباطؤ التقدم كد من الأولويات الصحية الرئيسية. منذ يتميز كد بواسطة خللا المعقدة من التوازن، النماذج الحيوانية تكاملية ضرورية لدراسة تطور وتقدم من كد. لدراسة تطوير التدخلات العلاجية كد والرواية في كد، ونحن نستخدم نموذج الاجتثاث استئصال الكلية 5/6th، وهو نموذج تجريبي من المعروف جيدا من مرض الكلى التدريجي، تشبه عدة جوانب من كد الإنسان. ويصل إجمالي التخفيض في كتلة الكلوي الكبيبي يسبب التدريجي وإصابة انبوبية-الخلالي، وفقدان النيفرون بقايا والتنمية من ارتفاع ضغط الدم النظامية والكبيبي. كما انه يرتبط مع تقدمية ضمن الكلية الشعرية الخسارة، التهاب الكبيبات و. عوامل الخطر لكد دائما تأثير على وظيفة بطانة الأوعية الدموية. لتقليد هذا، ونحن الجمع بين إزالة 5/6th من كتلة الكلوي مع أكسيد النيتريك (NO) استنزاف واتباع نظام غذائي عالي الملح. بعد وصول والتأقلم، وإعادة الحيواناتالوقت المتفق عليه لNO المانع سينسيز (NG-نيترو-L-أرجينين) (L-NNA) تستكمل لمياه الشرب (20 ملغم / لتر) لمدة 4 أسابيع، تليها استئصال إحدى الكليتين جانب الحق. بعد أسبوع واحد، يتم إجراء استئصال الكلية المجموع الفرعي (SNX) على الجانب الأيسر. بعد SNX، يسمح للحيوانات لاسترداد لمدة يومين تليها LNNA في مياه الشرب (20 ملغم / لتر) لفترة أخرى مدتها 4 أسابيع. واصلت اتباع نظام غذائي عالية من الملح (6٪)، على أن تستكمل في الأرض تشاو (انظر الإطار الزمني الشكل 1)، في كافة مراحل التجربة. ويتبع تطور الفشل الكلوي مع مرور الوقت من خلال قياس البلازما اليوريا، وضغط الدم الانقباضي وبروتينية. من قبل ستة أسابيع بعد SNX، وقد وضعت الفشل الكلوي. يتم قياس وظائف الكلى باستخدام حبوب "المعيار الذهبي" وحمض الهيبوريك شبه الأمينية (PAH) تكنولوجيا إزالة الألغام. ويتميز هذا النموذج من كد من انخفاض في معدل الترشيح الكبيبي (GFR) وتدفق البلازما الكلوي الفعال (ERPF)، ارتفاع ضغط الدم (ضغط الدم الانقباضي> 150 مم زئبق)، بروتينية (> 50 mg/24 ساعة) ويوريمية معتدل (> 10 ملم). وتشمل الميزات النسيجية الضرر انبوبية-الخلالي التي تعكسها التهاب، ضمور أنبوبي وتليف وتصلب الكبيبات التنسيق مما أدى إلى انخفاض كبير من الكبيبات صحي بين السكان بقايا (<10٪). المتابعة حتى بعد 12 أسبوعا تبين SNX مزيد من التقدم من كد.
ونظرا لطبيعته التقدمية، التي تلت نهاية المرحلة مرض الكلى، والاعتلال القلب والأوعية الدموية المرتبطة بها والوفيات، كد هي مشكلة متنامية للصحة العامة 1. وبالتالي تباطؤ التقدم كد من الأولويات الصحية الرئيسية. منذ يتميز كد بواسطة خللا المعقدة من التوازن، النماذج الحيوانية تكاملية ضرورية لدراسة تطور وتقدم من كد. تتكون الكلى من مجموعة واسعة من أنواع مختلفة من الخلايا التي تتفاعل مع بعضها البعض. لا يمكن أن تحاكي هذا التعقيد في المختبر.
لدراسة التدخلات العلاجية رواية في كد، ونحن نستخدم نموذج 5/6th استئصال الكلية الاجتثاث، وهو نموذج تجريبي معروفة من مرض الكلى التدريجي، تشبه عدة جوانب من كد الإنسان 2،3. ويصل إجمالي التخفيض في كتلة الكلوي الكبيبي يسبب التدريجي وإصابة انبوبية-الخلالي، وفقدان النيفرون بقايا والتنمية من ارتفاع ضغط الدم النظامية والكبيبي. يترافق ذلك مع البرامج الحديثة اضافة بالصورessive ضمن الكلية فقدان شعري 4، التهاب الكبيبات و. عوامل الخطر لكد دائما تأثير على وظيفة بطانة الأوعية الدموية 5. كنا سلالة الفئران (لويس) التي هي مقاومة للتطوير كد نسبيا، وبالتالي فإننا مجتمعة إزالة 5/6th من كتلة الكلوي مع أكسيد النيتريك (NO) استنفاد 6، 7، 8 واتباع نظام غذائي ملح عالية 9. بعد وصول والتأقلم، والحيوانات تحصل على NO المانع سينسيز (L-NNA) تستكمل لمياه الشرب (20 ملغم / لتر) لمدة 4 أسابيع، تليها استئصال إحدى الكليتين جانب الحق (UNX) مع استمرار L-NNA بعد يومين . بعد أسبوع واحد، يتم تنفيذ المجموع الفرعي استئصال الكلية (SNX) أي إزالة 2/3rds من كتلة الكلوي على الجانب الأيسر. بعد SNX، يسمح للحيوانات لاسترداد لمدة 2 أيام ثم مرة أخرى بنسبة 20 ملغ / لتر في مياه الشرب LNNA لمدة 4 أسابيع. واصلت اتباع نظام غذائي عالية من الملح (6٪)، على أن تستكمل في الأرض تشاو (انظر الإطار الزمني الشكل 1)، في كافة مراحل التجربة. Tانه سبب لأداء UNX على الجانب الأيمن وSNX على الجانب الأيسر هو أن الأوعية الكلوية هي أطول على الجانب الأيسر مما يجعل من الاسهل للوصول إلى الكلى دون تمتد الأوعية كثيرا عندما يتعرض الكلى خارج الجسم . في الأدب، وصفت النماذج التي يتم إزالة أعمدة من الكلية اليسرى أولا، تليها UNX من الكلية اليمنى بعد أسبوع واحد 10،11،12. في أيدينا أظهر هذا النموذج أكثر بكثير السريع تطوير الفشل الكلوي، ولكن أيضا تباين أكبر بكثير في فقدان وظائف الكلى. ويتبع تطور الفشل الكلوي مع مرور الوقت من خلال قياس البلازما اليوريا، وضغط الدم الانقباضي وبروتينية. من قبل ستة أسابيع بعد SNX، وقد وضعت الفشل الكلوي، والتي تتميز انخفاض ملحوظ في معدل الترشيح الكبيبي (69٪) وتدفق البلازما الكلوي فعالة (62٪) 13 ارتفاع ضغط الدم (ضغط الدم الانقباضي> 150 مم زئبق)، بروتينية (> 50 mg/24 HR) ومعتدل يوريمية (> 10 ملم). وتشمل الميزات النسيجية tubulالضرر O-الخلالي التي تعكسها التهاب، ضمور أنبوبي وتليف وتصلب الكبيبات التنسيق مما أدى إلى انخفاض كبير من الكبيبات صحي بين السكان بقايا (<10٪). المتابعة حتى بعد 12 أسبوعا تبين SNX مزيد من التقدم من كد، وتوفير فرصة لتقييم التدخلات العلاجية.
الاستئصال الجراحي لل5/6th من كتلة الكلوي في الفئران لويس، جنبا إلى جنب مع اتباع نظام غذائي غني بالملح وNOS تثبيط مؤقت يؤدي إلى نموذج من كد كد يشبه الإنسان وتسمح دراسة الآليات السببية ونجاعة التدخلات العلاجية في كد.
نموذج استئصال الك?…
The authors have nothing to disclose.
نشكر كريستا دن Ouden لها المساعدة التقنية الممتازة. وأيد هذه التقنية ماليا من قبل مؤسسة الكلى الهولندية، ومنحة C06.2174. ويدعم MCV من قبل المنظمة الهولندية للأبحاث العلمية (NWO) VIDI-منحة 016.096.359.
Reagent | |||
L-NNA | Sigma-aldrich | N5501 | |
Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm | Johnson&Johnson | Ms0005 | |
Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 | Ethicon | V303H | |
Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 | Ethicon | V392H | |
Buprenorphine (0.3 mg/ml) | Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals | unknown | |
Equipment | |||
Student Tissue Forceps – 1×2 Teeth 12 cm | Fine Science Tools (FST) | 91121-12 | |
Student Standard Pattern Forceps | FST | 91100-12 | |
Mayo Scissors | FST | 14010-15 | |
2X Semken Forceps | FST | 11008-13 | |
Student Iris Scissors | FST | 91460-11 | |
Olsen-Hegar Needle Holder | FST | 12002-14 |