Het artikel beschrijft een gemakkelijk gemakkelijk adaptieve<em> In vitro</em> Model om macrofaag polarisatie te onderzoeken. In aanwezigheid van GM-CSF/M-CSF worden hematopoietische stam / progenitorcellen uit het beenmerg gericht in monocytische differentiatie, gevolgd door M1 of M2 stimulatie. De activatie status kan worden gevolgd door veranderingen in celoppervlakteantigenen, genexpressie en signaaltransductie wegen.
Het artikel beschrijft een gemakkelijk gemakkelijk adaptief in vitro model om macrofaag polarisatie te onderzoeken. In aanwezigheid van GM-CSF/M-CSF worden hematopoietische stam / progenitorcellen uit het beenmerg gericht in monocytische differentiatie, gevolgd door M1 of M2 stimulatie. De activatie status kan worden gevolgd door veranderingen in celoppervlakteantigenen, genexpressie en signaaltransductie wegen.
Onderscheiden van klassieke ontstekingsreacties macrofagen die weefsels infiltreren vertonen vaak gepolariseerd activeringsstatus die een cruciale rol in het regelen gastheerweefsel fysiologische functies 1-8 speelt. Na stimulatie kunnen macrofaagactivering worden gesorteerd in classic (M1) en alternatieve (M2) activering 2, 4, 9. M1 macrofaag activatie afhankelijk Toll-achtige receptoren (TLRs) en activering van nucleaire factor kappa B (NFKB) / c-Jun N-eindstandige kinase 1 (JNK1), wat leidt tot de productie van inflammatoire cytokines, zoals TNF-α en IL- 1β en activering van iNOS dat resulteert in verhoogde productie van reactieve zuurstofsoorten zoals nitride oxide (NO) 10, 11. Daarentegen M2 macrofaag activatie werft PPARy, PPARö of IL-4-STAT6 wegen, waardoor alternatieve, anti-inflammatoire (M2) activatie die is geassocieerd met verhoogde expressie van CD206 mannose receptor en arginase 1 (Arg1) 6, 12 – 14 </ Sup>.
Beenmerg afgeleide macrofagen (BMDM) presenteren een ideaal in vitro model om de mechanismen die polarisatie van geactiveerde macrofagen 15 begrijpen. Specifiek, kan de activering van macrofagen M1 worden geïnduceerd door lipopolysacchariden (LPS) stimulatie, terwijl polarisatie M2 macrofagen kunnen worden geïnduceerd door IL-4 en / of IL-13. Ouder beenmerg macrofagen en geactiveerde macrofagen kunnen worden geïdentificeerd aan flowcytometrie-analyse voor expressie van oppervlakte-antigenen, waaronder CD11b, F4/80, CD 11 c, CD206, CD69, CD80 en CD86 9, 16, 17. Bovendien kunnen veranderingen in cytokine productie en mobiele signaalwegen verbonden macrofaag polarisatierichting gemeten door kwantitatieve RT-PCR en Western-blotting, respectievelijk. Samenvattend kan muis beenmerg macrofagen dienen als een relevant model te bestuderen polarisatie macrofagen in vitro.
Wij rapporteren hier een eenvoudige en gemakkelijk aanpasbaar vitro procedure activatie van macrofagen afgeleid van beenmerg cellen. Deze procedure kan worden gebruikt voor het onderzoek van de mechanismen die verantwoordelijk zijn voor polarisatie van macrofagen. De zuiverheid van volwassen macrofagen verkregen met dit protocol gemiddeld 95-99%, en geen extra zuivering vereist zijn. Om de functie van specifieke genen van belang te onderzoeken in het kader van macrofaag polarisatie, ectopische expressie of gens…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door de American Heart Association (BGIA 7.850.037 aan Dr Beiyan Zhou).
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
IMDM | Thermo Scientific | SH30259.01 | |
Fetal bovine serum | Invitrogen | 10438-026 | |
Murine GM-CSF | PeproTech | 315-03 | |
NH4Cl | StemCell Technologies | 7850 | |
L-929 | ATCC | CCL-1 | |
70 μm cell strainer | BD Biosciences | 352350 | |
10 x PBS | Thermo Scientific | AP-9009-10 | |
Anti-mouse CD11b-APC | eBioscience | 17-0112-81 | |
Anti-mouse F4/80-FITC | eBioscience | 11-4801-81 | |
Anti-mouse CD69-PE | eBioscience | 12-0691-81 | |
Anti-mouse CD86-PE | eBioscience | 12-0862-81 | |
Propidium Iodine | Invitrogen | P3566 |