베이지 / Brite 셀에 Stromal 혈관 세포의 분리와 차별화
Summary
마우스의 흰색 지방 조직으로부터 격리 기본 흰색 preadipocytes는 베이지 색 / brite 세포로 구분 할 수 있습니다. 여기에 제시된 것은 백색 지방의 "브라우닝"의 분자 규정을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 모델 시스템입니다.
Abstract
브라운 adipocytes는 미토콘드리아의 호흡 사슬을 풀다 및 열 등의 화학 에너지를 발산 할 수있는 능력을 갖추고 있습니다. 흰 지방 조직 (그래서 베이지 색 또는 brite 세포라고도 함)의 UCP1 – 긍정적 인 갈색 adipocytes의 개발은 매우 같은 만성 감기에 노출 또는 PPARγ의 agonists의 환경 단서의 다양한 의해 유도되며, 따라서,이 세포 유형에 대한 치료 대상으로 잠재력이있다 비만 치료. 대부분의 불후의 지방 세포 라인 문화에 흰색 지방의 "브라우닝"의 과정을 요점을 되풀이 할 수는 없지만, 기본 adipocytes는 brite / 베이지 색 세포 개발의 분자 제어를 연구하기위한 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제공 피하 화이트 지방 조직에서 stromal 혈관 분율 (와트)에서 분리 . 여기 주요 preadipocytes을 효과적으로 격리와 문화에 베이지 / brite 셀에 차별화를 유도를위한 프로토콜을 설명합니다. 브라우닝 효과는 갈색 지방 선택 마르크의 표현에 의해 평가 될 수있다같은 UCP1과 같은 ERS.
Introduction
비만은 크게 증가하고 세계이며, 지금은 공중 보건 1 가장 심각한 문제 중 하나를 간주됩니다. 이 조건은 지출에 대한 에너지 흡입 상대의 misbalance과 흰색 지방 조직 (와트)의 지질로 저장 초과하는 에너지의 결과에 관련되어 있습니다. 갈색 지방 조직은 열을 생산하기 위해 과도한 에너지를 발산 할 수있는 능력을 가지고있는 동안 확대 와트는 증가 몸 질량 및 무게와 연결되어 있습니다. 따라서 BAT은 춥고 비만 2,3 모두에 대한 보호 역할 할 수 있습니다. 이것은 단백질 1 (UCP1)를 uncoupling에 의해 미토콘드리아의 전자 교통 uncoupling에 의해 달성된다. 이 단백질은 BAT 3 thermogenesis를 nonshivering의 상징으로 간주됩니다. 최근 몇몇 연구는 성인 인간이 기능 BAT 4-8이 있으며, 따라서 인간의 BAT의 조작은 비만과 관련 질병과의 전투에서 잠재적 인 치료 개입 할 수 있다는 밝혔다.
jove_content는 "> 현재 증거가 갈색 adipocytes의 두 종류가 동물에 존재임을 나타냅니다;"고전 "또는"기존의 '갈색 지방은 태아 단계에서 개발 및 interscapular 지역과 다른 주변 조직에 헌신 갈색 지방 창고를 형성 반면. , 갈색 지방 (그래서 brite 또는 베이지 색 세포라고도 함)의 "inducible"형태는 사후 산후 단계에서 개발과 흰색 지방 조직에 사이 사이에 나타납니다. 갈색 adipocytes의 두 종류도 다른 발달 기원으로 구분되어 있습니다. 기존의 동안 갈색 adipocytes가 Myf5 전구체 myoblastsic 같은으로부터 발생, 와트 사이 사이 inducible 베이지 / brite 전지는 비 Myf5 계보 (Lineage) 9,10에서 발생. 또한,이 세포 유형의 규제 경로는 Myf5 파생 갈색과 다를 수 가능성이 adipocytes 11. 베이지 색 세포 (흰색 지방의 예 "브라우닝")의 개발은 만성 감기에 노출과에 대한 응답으로 활성화 할 수 있습니다β3-adrenoceptor-agonists 또는 성인 12-14에서 PPARγ의 agonists. 베이지 / brite 전지는 전체 에너지 균형의 조작을위한 유망 치료 표적이 될 가능성이 잠재적으로 비만 치료의 일부가 될 수 있습니다, 따라서, 환경 단서는 베이지 색의 개발을 제어하는하여 정확한 분자 메커니즘 및 신호 전달 경로를 이해하는 것이 중요합니다 세포.흰색 지방의 갈변의 분자 제어를 이해하려면, 체외 실험에서 가장 preadipocytes 아니라 비동기 적으로 이루어집니다의 차별화로 적합하며 원위치 15 세포를 감지하기가 어렵습니다 수 있습니다. 지방 세포 개발에 연구가 지금까지 이러한 3T3-L1, 3T3-F442A 또는 HIB1와 같은 세포 라인에 주로 수행 된 있지만, 이러한 세포 라인은 베이지 색 세포의 분자 서명을 부족 나타납니다. 한편, 피하 와트로부터 격리 기본 adipocytes는 proces을 요점을 되풀이 할 가능성이 가장 높은셀 자치 패션의 흰색 지방의 갈변의 s입니다. 여기 지방 조직에서 stromal-혈관 분수의 효과적인 격리와 PPARγ의 agonists에 대한 응답으로 흰 지방의 갈변을 유도를위한 프로토콜을 제공합니다. Rosiglitazone은 이러한 세포의 갈변의 특히 효과적인 중재자로 표시되었습니다. 이전 16 제안으로 휴대폰이 시스템은 베이지 색 / brite 세포의 개발을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제공하는 데 사용할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기 마우스의 기본 양식 adipocytes에 베이지 색 / brite 세포의 개발을 연구 할 수있는 신뢰할 수있는 셀룰러 시스템을 제시한다. 같은 몇 가지 가능한 불후의 세포 라인에 비해,이 시스템은 생체의 흰색 지방의 갈변으로 향상된 관련성을 제공 할 것으로 예상됩니다.
이러한 기본 adipocytes의 연구는 몇 가지 장점을 제공하더라도,이 또한 고려하는 것이 중요 일부 제한 사항…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 토론, 기술 지원 및 원고에 대한 편집 지원 Haruya 오노, Kosaku 시노다, 루이스 샤프, 에미 Tomoda, 로렌 루이즈 감사드립니다. 이 작품은 돌파구 바이오 메디컬 연구 및 Asubio 알약 주식회사에서의 프로그램에서 SKULA에 NIH (DK087853)에서 보조금 코펜하겐과 EU FP7 프로젝트 DIABAT (건강-F2의 대학에서 SHARE 박사 장학금이 지원 한에 의해 지원되었다 리자 매드슨와 Karsten Kristiansen에 -2011-278373). 우리는 또한 DERC 센터 보조금 (NIH P30 DK063720)을 인정합니다.
Materials
| Reagent | |||
| Collaginase D | Roche | 11088874103 | |
| Dispase II | Roche | 04942078001 | |
| CaCl2 | |||
| DMEM medium | Fisher | 10017-CV | With 2,5 g/l glucose & L-glutamine without sodium pyruvate |
| Insulin | |||
| T3 (3,3′,5-Triiodo-L-thyronine) | Sigma | T-2877 | |
| Indomethacin | Sigma | I-7378 | |
| Dexamethasone | Sigma | D-1756 | |
| IBMX | Sigma | I-5879 | |
| Rosiglitazone | Sigma | R-2408 | |
| Equipment | |||
| Collagen coated dishes | BD | 354450 | 10 cm plates |
| 70 μm filter | BD Falcon | 352350 | Cell strainer,70 μm nylon 1/ea |
References
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