在这里,我们描述了一个长期的嗅觉适应性的分子读出<em>秀丽隐杆线虫</em>。蛋白激酶G,EGL-4,稳定的适应措施是必要的,在初级感觉神经元对AWC。在长时间的气味暴露EGL-4转位从细胞质到细胞核的AWC。
在持续的刺激感官的神经元减少其对信号的灵敏度,以适应他们的反应。适应的反应有助于形状的重视和保护细胞过度刺激。 C.适应内的嗅觉电路线虫最早是由Colbert和巴格曼1,2。在这里,作者定义的参数的嗅觉适应的范例,这是他们设计一个隔离的能力,以适应挥发性气味的化学传感器翼细胞C型(AWC)感觉神经元检测缺陷的突变体的遗传筛选。当野生型C.线虫动物暴露于一个有吸引力的AWC-检测到的气味3为30分钟,他们会适应他们的气味的响应,然后将忽略适应中的趋化行为〜1小时测定气味。当野生型C.线虫动物暴露于一个有吸引力的AWC-〜1小时检测到的气味,他们将忽略在交流的适应气味hemotaxis行为分析〜3小时。这两个阶段的嗅觉适应性C.线虫被描述为短期嗅觉适应30分钟后,气味暴露引起的,长期的嗅觉适应60分钟后,气味暴露引起的。 L'Etoile酒店等。后来的工作,发现了一种蛋白激酶G(PKG)EGL-4的短期和长期的嗅觉适应性AWC神经元所需要的。 EGL-4蛋白含有核定位序列,有必要为长期的嗅觉适应性反应,但可有可无的短期嗅觉适应性反应的AWC 4。绿色荧光蛋白标记EGL-4,这是可能的可视化本地化的EGL-4在AWC暴露在长时间的气味。使用此功能齐全的GFP标记的EGL-4(GFP :: EGL-4)分子,我们已经能够开发出分子读出长期的嗅觉适应性AWC 5。使用这个米olecular读出的嗅觉适应,我们已经能够进行正向和反向遗传筛选,以确定突变的动物表现出有缺陷的亚细胞定位模式GFP :: EGL-AWC 6,7。在这里,我们描述:1)建造的GFP :: EGL-4表达动物; 2)的协议,用于培养动物长期臭味诱导核易位测定;和3)的得分长期臭味诱导核易位核GFP :: EGL-4状态的事件和恢复(重新过敏)。
这里描述的气味诱导核项目的GFP标记的EGL-4分子提供了一个强大的分子C.嗅觉适应中读出的线虫 。气味引起的核易位检测很简单,只需要几天的准备时间。 pyIs500,我们已经建立了这些实验动物,表达了标记,这说明了的AWC神经元以及表达GFP标记的EGL-4蛋白。因此,我们认为,实验者可以非常迅速,几乎没有工作经验这一类的神经元(也许是经检查几十动物)后开始感觉很舒服?…
The authors have nothing to disclose.
我们想感谢斯科特·哈密尔顿,奥哈洛伦实验室的成员,仔细阅读这篇稿子。我们也感谢匿名审稿人很好的建议和有见地的意见。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Bacto Agar | Difco | DF0140-07-4 | NGM plates |
Sodium Chloride | Fisher Chemical | S671-10 | NGM plates |
Bacto Peptone | Difco | DF0118-07-2 | NGM plates |
Potassium Phosphate Dibasic | Fisher Chemical | S375-500 | S-Basal buffer and NGM plates |
Potassium Phosphate Monobasic | Fisher Chemical | P285-500 | S-Basal buffer and NGM plates |
Kimwipes – Small | Kimberly-Clark | LS2770 | |
Ethanol 100% | Gold Shield Chemical Co. | 43196-115 | diluting odors for chemotaxis assays |
Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C8106-500G | NGM plates |
Magnesium Sulphate | MP Biomedicals | 150136-500G | NGM plates |
Sodium Azide 99% | Fisher Scientific | ICN10289180 | Anesthetic |
Agarose – UltraPure | Invitrogen | 16500-500 | Agarose pads |
Benzaldehyde | Sigma-Aldrich | B1334-100G | AWC odor |
Butanone, ACS Grade | Sigma-Aldrich | 360473-500ML | AWC odor |
Microcentrifuge Tubes – 1.5 ml Colored | Denville | LS8147 | |
Pasteur Pipet Disposable Glass 5-3/4″ | Fisher Scientific | 13-678-20B | |
Stratalinker | Stratagene | Stratalinker 2400 | UV integration |
Filter Vacuum Bottle – 500 ml | Nalgene | 09-740-25B |