Occlusion bilatérale de l'artère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce Tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale
Summary
Il ya plus de preuves que le préconditionnement ischémique (PC) – un défi ischémique non dommageable pour le cerveau – confère une protection contre les transitoires à un accident ischémique dommageable ultérieure. Nous avons établi bilatérale carotide commune occlusion de l'artère (BCCAO) comme un stimulus de préconditionnement pour induire une tolérance ischémique précoce (IT) à transitoire ischémie cérébrale focale (induite par occlusion de l'artère cérébrale moyenne, MCAO) dans souris C57BL6 / J.
Abstract
Il ya plus de preuves que le préconditionnement ischémique – un défi ischémique non dommageable pour le cerveau – confère une protection contre les transitoires à un accident ischémique dommageable ultérieure. Nous avons établi une occlusion de l'artère carotide commune bilatérale comme un stimulus de préconditionnement pour induire début tolérance ischémique transitoire ischémie cérébrale focale dans souris C57BL6 / J. Dans cette vidéo, nous allons démontrer la méthodologie utilisée pour cette étude.
Introduction
L'AVC ischémique est une maladie avec un taux de mortalité élevé et un énorme fardeau socio-économique 1. Malgré les efforts scientifiques expérimentales et cliniques intensives tout au long des dernières décennies, les options de traitement pour les patients victimes d'AVC ischémiques aigus restent très limitées 2. Contrairement à cela, l'augmentation du pourcentage de personnes âgées dans les pays développés augmentera considérablement l'incidence et de prévalence des patients avec AVC ischémique dans les prochaines décennies 3. Par conséquent, il ya un besoin urgent de nouvelles stratégies de traitement chez les patients ayant subi un AVC ischémique.
Une approche consiste à acquérir une meilleure compréhension des mécanismes d'adaptation endogène du cerveau pour faire face à un stimulus nuisible. Cette neuroprotection dérivé du cerveau est également connu comme le préconditionnement ischémique (PC) ou la tolérance ischémique (IT) et décrit un phénomène dans lequel un stimulus nociceptif non dommageable au niveau du cerveau, induit une résistance transitoirecontre une suite dommageable ischémique insulte 4. Il se produit dans deux fenêtres de temps différents: au début, ce qui se produit en quelques minutes à quelques heures après PC et retardés IT, qui a besoin d'un temps de latence de quelques heures à se produire 4.
Jusqu'à présent, la recherche sur l'informatique dans le cerveau a mis l'accent sur le retarder. On sait beaucoup moins sur les mécanismes de début IT. L'objectif de cette étude est d'établir bilatérale carotide commune occlusion de l'artère (BCCAO) qui est un stimulus mis en place pour l'inciter retardé, comme un PC stimulus suffisant pour induire tôt IT à transitoire ischémie cérébrale focale (induite par occlusion de l'artère cérébrale moyenne, MCAO) dans des souris C57BL6 / J.
Au cours des deux interventions chirurgicales (BCCAO et MCAO), suivi du flux sanguin cérébral (CBF) par laser Doppler (LDF) a été réalisée.
BCCAO a été réalisée chez la souris anesthésiés et respirant spontanément. Les deux artères carotides communes (CCA) ont été exposéset occlusion pendant 60 sec puis 5 min de reperfusion. Cette séquence / reperfusion BCCAO a été répétée deux fois. Après la chirurgie, les souris sont rétablis rapidement et n'ont montré aucun signe d'altération fonctionnelle. Afin d'exclure, que le protocole BCCAO décrit ci-dessus n'a pas abouti à la mort cellulaire retardée dans le cerveau, nous avons réalisé une dUTP-biotine Nick étiquetage fin TdT médiée (TUNEL) coloration 72 heures après BCCAO (ou une intervention chirurgicale fictive) dans un groupe séparé.
MCAO est un modèle largement établi pour l'induction d'une ischémie cérébrale focale chez les rongeurs 5-7. Les interventions chirurgicales ont été réalisées en utilisant des procédures normalisées d'exploitation (SOP) 8. Après avoir exposé gauche CCA, un monofilament silicium recouverte a été introduit dans le CCA distale, avancé par l'artère carotide interne (ACI) dans le polygone de Willis jusqu'à l'artère cérébrale antérieure (ACA) et de ce fait, l'origine de l'artère cérébrale moyenne ( MCA) a été occulté pendant une période de temps définie. Dans cette étude, nousutilisé 45 min de MCAO, ce qui se traduit généralement par une lésion ischémique dans le territoire MCA impliquant les zones du cerveau striatum et cortical.
Dans notre étude, nous avons analysé le profil temporel de début IT utilisant BCCAO que le stimulus de PC. Nos données indiquent que le délai optimal entre BCCAO et MCAO pour induire tôt, il est de 30 min.
Dans cette vidéo, nous allons donner une démonstration de deux interventions chirurgicales, à savoir BCCAO et MCAO.
Protocol
Representative Results
Discussion
Dans notre étude, nous avons montré que trois séquences de BCCAO, chacune durant une minute et suivie d'une reperfusion pendant cinq minutes, sont un PC stimulus ischémique suffisante pour induire tôt IT.
En outre, nous avons démontré que le protocole de préconditionnement utilisée est une procédure invasive et sûre mineur sans morbidité postopératoire remarquable, aucun signe d'apoptose dans le cerveau et aucune mortalité. Plusieurs protocoles de préconditionnement on…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the instrument | Company | Catalogue number/model |
| Binocular surgical microscope | Zeiss | Stemi 2000 C |
| Light source for microscope | Zeiss | SteREO CL 1500 ECO |
| Heating pad with rectal probe | FST | 21061-10 |
| Stereotactic frame | David Kopf | Model 930 |
| Scissors | FST | 91460-11 |
| Dumont forceps #5 | FST | 11251-10 |
| Dumont forceps #7 | FST | 11271-30 |
| Mircovascular clamp | FST | 00398-02 |
| Clamp applicator | FST | 00072-14 |
| Springscissors | FST | 15372-62 |
| Needle holder | FST | 12010-14 |
| Needles | Feuerstein, Suprama | BER 562-20 |
| 5-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | |
| 7-0 silk suture | Feuerstein,Suprama | |
| 8-0 silk suture | Feuerstein, Suprama |
References
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