このビデオプレゼンテーションは、前脳機能をサポートする2つの最も重要性の高い血管構造を収穫する方法を示しています。彼らは、関連付けられている髄膜(MAV)と脳血流と脳脊髄液(CSF)の恒常性に必要である脈絡叢と一緒に脳表面(表層)血管系である。
このビデオプレゼンテーションをサポートしている前脳機能は、適切な脳内に存在しない、最も重要な2つの高度に血管構造を収穫する方法を示すために作成されました。彼らは、関連付けられている髄膜(MAV)と脳血流と脳脊髄液(CSF)の恒常性に必要である脈絡叢と一緒に脳表面(表層)血管系である。採取された組織は、生化学的および生理学的解析に適しており、MAVはアンフェタミンおよび温熱1,2によって生成される損傷に対して敏感であることが示されている。頭部外傷の震とうの種類を調査する際にも、MAVで収穫されたメジャーとマイナーの脳血管系は、潜在的に高い関心が持たれている。このプレゼンテーションで解剖しMAVは髄膜とメジャーとマイナーの脳表面血管系の軟膜とクモ膜の一部(少なく硬膜)から構成されます。叢は解剖脈絡膜は、lに常駐する構造ですオールドフィールドとマッキンリー3,4,5,6に記載されているようateralは、心室。これらの二つの組織を採取するために使用される方法はまた、髄膜および大きい脳の表面の血管系を欠いた地域の皮質組織の採取を容易にし、等かかる二つの組織の解剖などの線条体、視床下部、海馬、などの他の脳組織を採取すると互換性があります5から10分の合計から。図に示すように、このプレゼンテーションに記載されて解剖し、MAVと脈絡叢の遺伝子発現レベルは、NCBI GEOのリポジトリでGSE23093(MAV)とGSE29733(脈絡叢)で見つけることができます。このデータにはなっている、とは、MAVと脈絡叢の機能を理解し、それらの機能に悪影響を及ぼすような重篤な神経毒性方法温熱療法とAMPHなどのイベントをさらに支援するために使用されています。
テクニカルMAVの側面および脈絡叢郭清
それは、脳が生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水または水酸化ナトリウムでほとんどの時間を "水没"を持っているMAVの解剖時に重要です。 MAVと皮質は解剖中に脱水できるようにすると、これはMAVおよび/または皮質からこれらの付着MAVのセクションを削除することができないことの結果で収穫皮質組織の量が増加します皮質層Iにしっかり付着し、MAVになります。また、忍耐は解剖時に必要です。一つは解剖中に1つの半球の皮質からMAVを除去する際にいくつかの抵抗に遭遇した場合、もう一度、他の半球に切り替えて抵抗が発生した側に後で戻ってください。この方法は完璧にいくつかの練習時間がかかりますかとMAV組織の一貫して均一な収穫が達成される前に、約5〜15 "実践"解剖を必要とします。解剖とレモの起動方法脳の基底部における動脈輪でMAVのvalは、サポートとして大きな血管系を使用することによって髄膜の除去を容易にする "足場"を
多くの血のもともとMAV血管系の犠牲の後には、解剖時に排出されるべきである、とMAVから収穫されたRNAの5%未満では、血液由来のものである必要があります。断頭し、脳を除去する前の組織学的技術を用いて、生理食塩水50〜70mlで動物を灌流することで、ほとんどすべての血液を除去することが可能です。しかし、その後、解剖時にMAV組織を視覚化することがはるかに困難です。 MAV組織の "汚染"の3つの最も可能性が高いソースは松果体、皮質層I組織と残留嗅球組織であるが、それは準備のために下垂体組織を取得することも可能です。 MAVで松果体汚染が濃い赤色であるラウンド1〜2mmの直径の球体を含むMAVによって検出されます。主要機能松果体は、通常、MAVとは全く異なるものと見なされます。その主な機能は、概日リズム9の側面を調節し、脂質前駆体のlipoxygenation 10でメラトニンを生成することです。リポキシゲナーゼ活性を制御する遺伝子のLOXが 、主に松果体10の大人に存在すると考えられていたが、我々の結果は、それはまた、MAVの大幅なレベルで一貫して存在することを示す。ずっとそれで囲まれた色の淡いアール一部の1〜2mmの緻密な組織を持つピンクがかったクモの巣のようなMAV組織中の残留皮質や嗅球汚染の結果。これは、バッファの表面にMAVを "浮遊"してから、2解剖鉗子を使用して重い皮質または電球組織を除去することによって発見することができます。
皮質層私は組織、視床下部組織または松果腺からMAVの汚染が存在しているなら、いくつかの遺伝子が有意になります"クリーン"解剖で通常存在するものよりも大幅大きい式。松果腺とMAVの汚染は、メラトニンの合成に必要であるアリルアルキルアミンN-アセチルトランスフェラーゼ(Aanat)のより高い発現をもたらすでしょう。松果体の汚染は、MAVの解剖中に発生した場合、残念ながら、MAVでLOXのレベルが正確に判定することができません。皮質組織とMAVの汚染は、このようなhippocalcin(HPCA)、パルブアルブミン(Pvalb)および/ または神経ペントラキシン受容体(Nptxr)などのニューロン特異的遺伝子の高発現をもたらすでしょう。視床下部組織とMAVの汚染は成長ホルモン1(GH1)、プロオピオメラノコルチン(POMC)のより高い発現をもたらすでしょう。収穫された組織内の一部の汚染が存在しない場合においては、これらの遺伝子のほとんどが同定され、遺伝子発現解析で使用されていないことができます。これは循環BLOに存在する遺伝子のために特に重要であるまだMAVや脈絡叢に存在してもよいOD。
収穫MAVと脈絡叢からの遺伝子発現データを解釈する
関連付けられている髄膜(MAV)と脈絡叢と一緒に脳表面(表層)血管系は脳血流と脳脊髄液(CSF)ホメオスタシス4,11、12、13、14、15、16、17のために必要である。組織の収穫は生化学的および生理学的解析に適している、とMAVは、遺伝子発現解析によるアンフェタミンおよび温熱1,2によって生成される損傷に対して敏感であることが示されている。また、これらの結果は、重度の温熱療法と一般18,19,20における脳血管系へのアンフェタミンへの暴露について知られているものに見合っています。ヒトでの臨床データは硬膜下血管系はアンフェタミンとメタンフェタミン21,22による損傷に対して敏感であるという信念をサポートしています。同様に、メジャーとマイナーの脳血管系は含め頭部外傷23,24 25の震とうの種類を調査する際に潜在的に高い関心があるMAVに収穫さ軟膜髄膜の層でそれらをING。 MAVから得られた現在の遺伝子発現プロファイルは、軟膜とくも膜おそらく髄膜は脳脊髄液の組成を調節するのに予想以上に大きな役割を果たしている可能性があることを示しています。将来的には、解剖顕微鏡の技術の使用によって、それは軟膜とクモ膜が存在し、おそらく互いに大きな動脈の血管系から分離することができ、さらに、MAVを含む組織を分離することが可能することができるようにします。これは、収穫したMAVのこれらの3つのコンポーネントの各々の機能の良い解釈を可能にするでしょう。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、NCTR / FDAによって賄われていた。
Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Normal Saline (9 grams saline/ 1 Liter H2O) | In-house | Dissection buffer | |
0.1 M Sodium Phosphate pH 7.4 | In-house | Dissection buffer | |
Bone Rongeurs | Roboz | RS-8300 | Skull bone removal |
Forceps-bent tip (4″ long & 0.8 mm wide tip) | Roboz | RS-5135 or RS-5137 | Dissecting forceps |
Forceps-straight tip (5.5″ long ) | Roboz | RS-8124 or RS-8104 | Thumb Dressing forceps |