Misure di KV7 (KCNQ) canale attività di potassio in miociti isolati arteriosi (utilizzando tecniche elettrofisiologiche di patch clamp) in parallelo con misure di constrictor / dilatatore risposte (usando myography pressione) può rivelare importanti informazioni sul ruolo di KV7 canali in fisiologia vascolare muscolatura liscia e farmacologia.
Contrazione o rilassamento delle cellule muscolari lisce all'interno delle pareti delle arterie di resistenza determina il diametro dell'arteria e controlla quindi il flusso di sangue attraverso il vaso e contribuisce alla pressione arteriosa sistemica. Il processo di contrazione è regolato principalmente dalla concentrazione di calcio citosolico ([Ca 2 +] cyt), che è a sua volta controllata da una serie di trasportatori e canali ionici. I canali ionici sono intermedi comuni vie di trasduzione del segnale attivati da ormoni vasoattivi per effettuare vasocostrizione o vasodilatazione. E i canali ionici sono spesso presi di mira da agenti terapeutici intenzionalmente (es. calcio antagonisti utilizzati per indurre vasodilatazione e la pressione sanguigna più bassa) o involontariamente (ad esempio per indurre indesiderati effetti collaterali cardiovascolari).
KV7 (KCNQ) voltaggio-attivati i canali del potassio sono stati recentemente implicati come importante targ fisiologici e terapeuticiets per la regolazione della contrazione della muscolatura liscia. Per chiarire i ruoli specifici dei KV7 canali sia trasduzione del segnale fisiologico e nelle azioni di agenti terapeutici, bisogna studiare come la loro attività è modulata a livello cellulare e valutare il loro contributo nell'ambito dell'arteria intatta.
Le arterie mesenteriche ratto forniscono un utile sistema modello. Le arterie possono essere facilmente sezionato, puliti del tessuto connettivo, e utilizzato per preparare isolate miociti arteriosi patch clamp per elettrofisiologia, o incannulata e pressione per misure di vasocostrittori / vasodilatatore risposte fisiologiche in condizioni relativamente. Qui descrivere i metodi utilizzati per entrambi i tipi di misure e di fornire alcuni esempi di come il disegno sperimentale possono essere integrati per fornire una comprensione più chiara dei ruoli di questi canali ionici nella regolazione del tono vascolare.
I metodi e gli approcci sperimentali descritti qui sono piuttosto robusti e in grado di produrre risultati chiari e riproducibili se applicato con meticolosa attenzione ai dettagli. Buone registrazioni elettrofisiologiche e costrizione / dilatazione dei segmenti arteriosi dipendono la salute delle cellule e segmenti di arteria, rispettivamente. Preparazioni di cellule può variare da un giorno all'altro, anche utilizzando lo stesso protocollo. Le soluzioni di isolamento può essere utilizzato per un massimo di 2 set…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione da National Heart, Lung, and Blood Institute (NIH R01-HL089564) per KLB e pre-dottorato dalla American Heart Association (09PRE2260209) e Arthur J. Schmitt Fondazione BKM.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Sodium Chloride | Sigma | S5886 | Dissecting Solution: 145 Bath solution for Electrophysiology*: 140 Internal solution for electrophysiology: 10 Isolation solution for myocytes*: 140 Bath solution for pressure myography: 145 Lumen solution for pressure myography: 145 |
Potassium chloride | Sigma | P5405 | Dissecting Solution: 4.7 Bath solution for Electrophysiology*: 5.36 Internal solution for electrophysiology: 135 Isolation solution for myocytes*: 5.36 Bath solution for pressure myography: 4.7 Lumen solution for pressure myography: 4.7 |
Potassium EGTA | Sigma | E4378 | Internal solution for electrophysiology: 0.05 |
HEPES | Sigma | H9136 | Bath solution for Electrophysiology*: 10 Internal solution for electrophysiology: 10 Isolation solution for myocytes*: 10 |
Disodium hydrogen phosphate | Sigma | S5136 | Isolation solution for myocytes*: 0.34 |
Potassium hydrogen phosphate | Sigma | P5655 | Isolation solution for myocytes*: 0.44 |
Magnesium Chloride | Sigma | M2393 | Bath solution for Electrophysiology*: 1.2 Internal solution for electrophysiology: 1 Isolation solution for myocytes*: 1.2 |
Calcium Chloride | Sigma | C7902 | Bath solution for Electrophysiology*: 2 Isolation solution for myocytes*: 0.05 |
Sodium phosphate | Fisher Scientific | BP331-1 | Dissecting Solution: 1.2 Bath solution for pressure myography: 1.2 Lumen solution for pressure myography: 1.2 |
Magnesium Sulfate | Sigma | M2643 | Dissecting Solution: 1.17 Bath solution for pressure myography: 1.17 Lumen solution for pressure myography: 1.17 |
MOPS | Fisher Scientific | BP308 | Dissecting Solution: 3 Bath solution for pressure myography: 3 Lumen solution for pressure myography: 3 |
Pyruvic acid | Sigma | P4562 | Dissecting Solution: 2 Bath solution for pressure myography: 2 Lumen solution for pressure myography: 2 |
EDTA dihydrate | Research Organics | 9572E | Dissecting Solution: 0.02 Bath solution for pressure myography: 0.02 Lumen solution for pressure myography: 0.02 |
D-Glucose | Sigma | G7021 | Dissecting Solution: 5 Bath solution for Electrophysiology*: 10 Internal solution for electrophysiology: 20 Isolation solution for myocytes*: 10 Bath solution for pressure myography: 5 Lumen solution for pressure myography: 5 |
Bovine serum albumin | Sigma | A3912 | Dissecting Solution: 1% Lumen solution for pressure myography: 1% |
pH | Dissecting Solution: 7.4 Bath solution for Electrophysiology*: 7.3 Internal solution for electrophysiology: 7.2 Isolation solution for myocytes*: 7.2 Bath solution for pressure myography: 7.4 Lumen solution for pressure myography: 7.4 |
||
Osmolarity | Dissecting Solution: 300 Bath solution for Electrophysiology*: 298 Internal solution for electrophysiology: 298 Isolation solution for myocytes*: 298 Bath solution for pressure myography: 300 Lumen solution for pressure myography: 300 |
||
*11 |
|||
Table 1. Components of solutions used in the experiment. |