이 비디오의 전반적인 목표는 타겟 망막 주사를 수행하는 방법을 보여주기입니다<em> 비켜에서</em배아 일 4 (E4)에 관한 햄버거와 해밀턴 단계 22-23,에서 병아리 배아 망막으로의 DNA / RNA 구조의> electroporation. 이 기술은 유전자 발현, 유전자 조절, 그리고 여자의 망막 개발에 형태학의 변화를 연구하는 것은 매우 유용합니다.
Abstract
닭 배아 망막 높은 척추 동물의 망막 개발을 공부하는 훌륭한 도구입니다. 때문에 대형 및 외부 발전으로 인해, 그것은 재조합 DNA / RNA 기술을 사용하여 병아리 배아 망막를 조작하는 비교적 매우 쉽습니다. 태아의 망막에 DNA / RNA 구조의 Electroporation은 망막 개발하는 동안 망막 줄기 / 전구 세포에서의 유전자 조절을 연구하는 큰 잇점을 가지고있다. 이러한 리포터 유전자 분석, 표현을 통해, 유전자 등 (shRNA) 허물고 유전자 등 assays의 다른 유형은 electroporation 기술을 사용하여 수행할 수 있습니다. 이 비디오는 타겟 망막 주사를 보여주고 배아 일 4 (E4)에 관한 햄버거와 해밀턴 무대 22-23,에서 배아 여자의 망막에 비켜 electroporation 인치 마커로 녹색 형광 단백질 (GFP)을 표현하는 플라스미드 DNA를 직접으로 전달됩니다 의하여 여기 비켜 electroporation 기술에 신속하고 편리하게 보여줄병아리 배아 subretinal 공간과 망막 줄기 / 전구 세포로 DNA의 이해를 촉진하기 위해 전기 펄스에 의해 따라갔다. E4에서 망막 주입과 electroporation의 새로운 방법은 E1.5 2 시에 주입과 electroporation의 전통적인 방법으로 어렵게되었습니다 후반 태생의 뉴런 1을 포함한 모든 망막 세포 유형의 시각화 수 있습니다.
Protocol
이전에 사소한 수정과 함께 다른 주피터 동영상 2, 서류 3 설명된대로 프로토콜의 일부 지역이 수행되므로 우리는 여기에 자세히들을 논의하지 않습니다. 1. 에그 처리 및 니들 준비 계란이 최대 1 일주일 동안 약 13도 ° C에서 쿨러 와인에 저장할 수 있습니다. 온도가 너무 높은 경우에는 낮은 온도가 높은 사망률을 초래하면서, 태아는 비정상적으로 ?…
Discussion
망막 주사를 타겟 및 E4 단계에서 배아 망막에서 비켜 electroporation에 특별히 단일 세포 수준에서 모두 6 개 주요 망막 세포 유형을 시각화하는 능력의 결과로 망막 전구 세포를 타겟팅할 수 있습니다. HH10에서 비켜 electroporation에서 (~ E1.5)을 대상으로 광 소포는 눈을 형성 발전 전지를 transfect 수 있습니다. 그러나 이러한 세포는 현재 매우 높은 매출액을 가지고 있으며이 방법은 망막 세…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 그의의 HD 카메라 이용 (캐논 VIXIA HFS100) 동안 집게 Maaz Enver 감사드립니다. 이 작품은 NIH (EY018738), 척수 연구에서 뉴저지위원회 (08-3074-SCR-e-0과 10-3091-SCR-E-0) 및 부시 바이오 메디컬 연구 대상에서 교부금에 의해 부분적으로 지원되었다.
Materials
Name of the reagent
Company
Catalogue number
Comments
Fertilized pathogen-free (SPF) white leghorn chicken eggs
Sunrise Farms (Catskill, NY)
Chicken egg incubator
GQF manufacturing, Savannah, GA
Model-1550
Set to 60% humidity and 37.5°C.
Glass capillary tubes
World Precision Instrument Inc.
TW150F-4
0.1 ml syringe
Hamilton Co. Reno, Nevada
Gastight 1710
Alternatively 1ml syringe can be used as well
Masterflex Silicone (peroxide) Tubing
Cole-Parmer
HV-96400-13
Cut a small piece (1 cm) for attaching the glass needle to the syringe