接种<em>克氏锥虫</em>在之前孵化的受精卵呈现寄生虫kDNA minicircle胚胎细胞的基因组中的整合。杂交揭示突变的垂直转移到后代。该的kDNA集成到编码在几个染色体区域和鸡只死亡与自身免疫性炎症心脏疾病。
克氏锥虫在婴幼儿急性感染收购似乎无症状,但约三分之一的慢性感染的个案表明达三十年或稍后的南美锥虫病。自身免疫性疾病和寄生虫的持久性竞争理论来解释1,2南美锥虫病的发病机制。南美锥虫病寄生虫的持久性和自身免疫性疾病中发挥不同的角色,我们接种的T。锥虫在气室的受精卵。成熟的鸡的免疫系统是一个严密的对T的生物屏障克氏锥虫感染根除的第一个星期增长3月底后,其免疫系统的发展。在孵化雏鸡寄生虫,但他们保留集成寄生虫线粒体动基体DNA(kDNA)minicircle在他们的基因转移到他们的后代。 kDNA在鸡基因组minicircle集成的文档由TARG获得eted总理TAIL-PCR技术,南方杂交,克隆和测序3,4。的kDNA minicircle集成破裂转录和免疫系统因素的开放阅读框,磷酸酶(GTP酶),腺苷酸环化酶和磷酸化酶(PKC,NF-κB的激活,PI-3K)与细胞的生理,生长,分化3,5 – 7,其他基因的功能。重症心肌炎,因拒绝目标心脏纤维细胞毒性T细胞效应被认为是在的kDNA突变鸡,表现出类似人类南美锥虫病看出,炎症性心肌病。值得注意的是,心脏衰竭及骨骼肌无力成年鸡目前在1号染色体8 kDNA dystrophin基因的断裂。类似genotipic改变与CD45的效应+,CD8γδ的,CD8α淋巴细胞进行组织破坏。因此,这种原虫感染可诱发基因驱动的自身免疫性疾病。
相反到哺乳动物容易受到终身吨克氏锥虫感染,鸡难治吨克氏锥虫感染。鸡模型系统的主要优点是消除感染的早期胚胎的免疫系统的发展。因此,唯一的寄生虫在鸡体内剩余的DNA被整合在几个位点。
使用剧毒吨的最优数量锥虫 trypomastigotes接种受精卵是向鸡胚胎的基因组整合kDNA minicircles获得关键的一步。现场的小鸡从100 trypomastigotes接种的鸡蛋孵化的速度是比获得500寄生虫的高4倍。应小心在10μL培养基接种到鸡蛋的气室中的寄生虫暂停。应该是没有蛋清泄漏。在最佳条件下,细胞内的寄生虫感染发生无线此后的感染是由先天免疫淘汰;几个小时后,一个星期内的宿主细胞所得的孵化和寄生虫乘法薄。 kDNA整合需要一个生活的感染,并不会导致融合成早期胚胎鸡蛋裸minicircles接种。在受控条件下的的kDNA阳性胚胎和控制应该被安置在37.5°C和65%的湿度。雏鸡在33℃室温存放在两个星期的笼子。此后,鸡在笼子里的暂停架1.5米宽的过道隔开的房间在22°C间过滤空气和积极的压力,以确保动物福利条件下不断枯竭。成人喂养的鸡议员,喝饮用水的自来水,实现全面成长和成熟,铺设鸡蛋在5个月的年龄。卫生程序维护结果的重复性的基本以 T工作时锥虫接种成肥沃的鸡蛋。
在鸡模型系统的T.克氏锥虫感染根除后,免疫系统的发育在胚胎发育的初期。此外被感染,从T.孵化小鸡锥虫接种的鸡蛋,在缺乏特异性抗体,是宽容的寄生虫抗原。 kDNA突变基因型修改和免疫监视击穿3鸡只被视为拒绝目标的心脏细胞的细胞毒性T细胞(最小单位拒绝, 图3)。基因型修改的T细胞呈现在体内自我组织加速排斥反应。主要病变部位是心脏,这是南美锥虫病的一个标志。从生理(监察)通过一个病理生理状态,显示克隆3细胞毒性T细胞增殖的在kDNA突变的鸡。
ţ他transkingdom模型系统显示了一种寄生虫引起的,基因驱动的自身免疫性疾病( 图6),从基因组的修改所产生的T。锥虫 kDNA minicircle集成。这些修改都没有见过从磅接种的鸡蛋孵出小鸡。
这种现象表明,炎症在kDNA突变鸡的自身免疫性心肌病的实验性治疗,可能需要药物抑制骨髓祖细胞浸润心肌特异性T细胞型,histocompatible健康的骨髓移植,以防止排斥反应的自我组织。
The authors have nothing to disclose.
南希·斯特姆,免疫学,微生物学和分子生物学,大卫格芬医学院,加州大学洛杉矶分校,批判性阅读的手稿,我们非常感激。国民议会研究CNPq的,基础研究发展FAPDF,巴西,支持本研究。我们感谢澳亚历山德罗·索萨,玛丽亚三Guimaro,西罗郭利民,安娜·卡西亚·罗萨,Roseneide阿尔维斯,和拉斐尔·安德拉德的技术援助,从巴西,巴西利亚大学。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Taq DNA Polymerase Recombinant | Invitrogen | 11615-010 | |
Platinum Taq DNA Polymerase | Invitrogen | 10966-030 | |
Random Primers DNA Labeling System | Invitrogen | 18187-013 | |
EcoRI | Invitrogen | 15202-021 | |
MboI | Invitrogen | 15248-016 | |
dNTP Set, 100mM Solutions | GE Healthcare | 28-4065-51 | |
Amersham Hybond – N+ -– Cat n. | GE Healthcare | RPN303B | |
PlasmidPrep Mini Spin kit | GE Healthcare | 28-9042-70 | |
NsiI | SIGMA -ALDRICH | R5884 1KU | |
DNA, Sodium Salt Fish Sperm | AMRESCO | 0644-10G | |
Mouse anti-chicken Bu-1b | SouthernBiotech | 8370-02 | |
Mouse anti-chicken CD45 | SouthernBiotech | 8270-08 | |
Mouse anti-chicken TCRγδ | SouthernBiotech | 8230-08 | |
Mouse anti-chicken CD8α | SouthernBiotech | 9220-02 | |
Mouse anti-chicken monocyte/macrophage | SouthernBiotech | 8420-02 | |
MyCycle Termocycler | Bio-Rad Laboratories | 580BR 5501 |