الفئران زرع نخاع العظام هو أسلوب يستخدم على نطاق واسع لدراسة آليات المناعية التي تحكم الطعم ضد المضيف المرض لدى البشر. القدرة على رصد أنماط الاتجار خلية T<em> في الجسم الحي</em> يسمح لتحليل مفصل للوضع وإدامة استجابات الخلايا T خلال الطعم ضد المضيف المرض.
Abstract
الطعم ضد المضيف المرض (GVHD) هو الحد الحاجز لاستخدام واسعة من زرع نخاع العظم كعلاج العلاجية لمجموعة متنوعة من أوجه القصور الدم. ويتسبب GVHD بواسطة الخلايا T الناضجة alloreactive موجودة في العظام الكسب غير المشروع نخاع التي غرست في المتلقي وتسبب تلفا للأعضاء المضيف. ومع ذلك، في الفئران، يجب إضافة خلايا T حتى العظم نخاع أن يسبب اللقاح GVHD. على الرغم من القيام بأعمال مكثفة لوصف T اضافة رد زرع الخلايا، bioluminescent تكنولوجيا التصوير هو وسيلة غير عدوانية لرصد أنماط الاتجار T خلية في الجسم الحي.
بعد التشعيع قاتلة، تزرع الفئران المتلقية مع خلايا نخاع العظام وsplenocytes الفئران من الجهات المانحة. يتم تضمين مجموعات فرعية من الخلايا T L2G85.B6 (الفئران المعدلة وراثيا التي تعبر عن وسيفيراز جوهري) في عملية الزرع. عن طريق زرع الخلايا مجموعات فرعية معينة فقط T، واحد قادر على تتبع مجموعات فرعية محددة الخلايا T في الجسم الحي،واستنادا إلى موقعها وتطوير الفرضيات فيما يتعلق بدور مجموعات فرعية محددة الخلايا T في تعزيز GVHD في نقاط زمنية مختلفة. في فترات محددة سلفا زرع آخر، وتصوير الفئران المتلقية باستخدام كاميرا CCD Xenogen IVIS. يمكن كميا شدة الضوء باستخدام برنامج السكن لتوليد صورة صورة زائفة الألوان يعتمد على كثافة الفوتون (أحمر = كثافة عالية، البنفسجي = منخفض الكثافة).
بين 4-7 أيام آخر زرع والفئران المتلقية تبدأ تظهر علامات سريرية للGVHD. وضعت كوك وآخرون.1 (أ) لنظام التسجيل quantitate تطور المرض استنادا إلى الفراء نسيج المتلقي الفئران وسلامة الجلد، والنشاط، وفقدان الوزن، والموقف. وسجل الفئران يوميا، والموت الرحيم عندما تصبح المحتضرة. الفئران المتلقية أصبحت تحتضر عموما 20-30 زرع آخر أيام.
نماذج الفئران هي أدوات قيمة لدراسة علم المناعة من GVHD. زرع الخلايا بشكل انتقائي خاص T مجموعات فرعية آلأدنى مستوى لتحديد دقيق لأدوار كل مجموعة فرعية يلعب. غير جراحية تتبع استجابات الخلايا T في الجسم الحي يضيف طبقة أخرى ذات قيمة للنماذج GVHD الفئران.
Protocol
1. قاتلة تشعيع وضع ما يصل إلى 10 في الفئران المتلقية قفص microisolator متوافق مع irradiator لاستخدامه. أشرق في 2 جرعات متساوية تلخيص الجرعة الإجمالية (الجرعة الإجمالية = 9 CGY للمستلمين BALB.B). يجب أن يكون تشعي…
Discussion
بروتوكول لإحداث GVHD في الفئران المقدمة هنا يمثل نموذجا ذات الصلة سريريا من GVHD الفئران. أنشئت أصلا من قبل بيرغر وآخرون في عام 1994، وC57BL / 6 إلى مزيج سلالة BALB.B هو MHC-المتطابقة، مع معدل وفيات GVHD بوساطة CD4 التابعة، CD8 T المستجيبات 2، تتشابه بشكل كبير مع السيناريو السر…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
اننا مدينون لGaughan أليس وانغ جينغ جياو-المعلقة التي الدعم التقني والمدخلات الفكرية، والدعم المعنوي كان لهم دور فعال في تحريك هذه الدراسات في المستقبل. وقدم الدعم لهذه الدراسات من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح AI036532 لجاه.
Anthony, B. A., Hadley, G. A. Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model. J. Vis. Exp. (66), e3697, doi:10.3791/3697 (2012).