Bir<em> Ex vivo</em> Hazırlık vasküler vazoaktif uyaranlara tepkiler ve pasif duvar mekaniği ile temel yapısal özelliklerinin değerlendirilmesi hem de sorgulama için büyük gracilis kas direnci arteriol izolasyonu için açıklanmıştır.
İzole mikrodamar hazırlanması, böylece perfüzyon direnci 1-5 farklı faktöre katkı kontrol eden damar çapı incelenmesi için izin veren bir ex vivo hazırlanması, ve. Bu başlangıçta. 15 birkaç yıl önce Uchida ve ark, büyük ölçüde, olduğu klasik bir deney preparatıdır. Bu ilk açıklama kapsamlı öncelikle Virginia 6-8 Üniversitesi'nde Dr Brian Duling laboratuvarında, değiştirilmiş ve geliştirilmiş oldu teknikleri için temel oluşturmuştur ve biz sayfalarda güncel bir yaklaşımla sunmak. Bu preparasyon özellikle tercih mikrodamar gibi bir sıçan gracilis arteriyol bakınız, ancak bazik hazırlanması kolay türler arasında yaklaşık 9-13 başka doku veya organ izole damarlarının uygulanabilir. Izole mikrodamarlar Mekanik (yani boyutlu) değişiklikleri kolayca değerlendirilebilirfizyolojik (örneğin, hipoksi, damar içi basınç veya kesme) veya farmakolojik zorluklar ve sağlam bir entegre yanıtları oluşan mekanik elemanlar içgörü sağlayabilir, ancak ex vivo, doku geniş bir dizi yanıt olarak. Bu yöntemin önemi de damar içi basınç (miyojenik), otonomik innervasyonu, hemodinamik de dahil olmak üzere, diğer kaynaklardan gelen katkıların çoğunun kontrolü için izin verirken o, mikrodamar çapında entegre regülasyonu üzerine etkilerinin kolay manipülasyon için izin vermesidir ( makaslama stresi), endotel bağımlı veya bağımsız uyaranlar, hormonal ve parankimal etkileri, kısmi bir liste sunmak için. Uygun deneysel koşullar altında ve uygun hedefleri ile, bu in vivo ya da kolayca geniş sistemik değişkenlerin uyduruk kontrolü için izin vermez yerinde doku / organ hazırlıklarda, üzerinde bir avantaj olarak hizmet verebilir.
MaBu hazırlığın jor sınırlama aslında onun güçlü yönlerinden sonucudur. Tanım olarak, bu gemilerin davranışları vasküler rezistans düzenlenmesinde en önemli katkıda bulunan birçok Gibi, nöral humoral, metabolik, vb dahil olmak üzere, kaldırılmış koşullarda çalışılmaktadır, araştırmacı önlemek için aşırı ihtar verilir yorumlanması ve bu hazırlık kullanılarak toplanan verilerin ekstrapolasyonu. Bu hazırlık ile ilgili endişe diğer önemli alan bu tür endotelinde veya damar düz kas gibi hücresel bileşenlere zarar çok kolay olabilir yani, hata bu tür değişken kaynak sokulabilir. Kuvvetle bireysel araştırmacı deney başlangıcında ve periyodik bir protokol boyunca hem hazırlık kalitesini sağlamak için uygun ölçümler kullanmak önerilir.
Bu genel teknik kolaylıkla en dokular için uygulanabilir olmasına rağmen sunulan protokolü, bir iskelet kası mikrodamar izolasyonu, çıkarma ve çift kanül açıklanmaktadır. Mevcut yazı için dönem "arteriyol" da önemli bir bir organ perfüzyon direnç düzenlemesine katkı sağlayan veya dinlenen aktif ton altında çapı 70-120 mikron arasında değişen bir direnç damarı tanımlamak için yazarlar tarafından kullanılmıştır doku.
Bazı değişikliklerle, bu si…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma, Amerikan Kalp Derneği (ÇED 0740129N) ve NIH T32 HL90610 tarafından desteklenmiştir.
Reagents and Equipment | Company | Comments/Catalogue # |
Vessel Chamber | Custom | Dave Eick (MCW) |
Heated Circulating Water Bath | PolyScience and Haake | Haake DC 10 |
Pipets | Frederick Haer & Co. | Capillary Tubing 2.0 mm OD x 1.0 mm ID (27-33-1) |
Pressure Monitor | World Precision Instruments | |
Water Jacketed Reservoir | Custom | |
External Light Source | World Precision Instruments | Novaflex |
Pipet Puller | MicroData Instruments | PMP102 Micropipet Puller |
Full complement of surgical tools | Fine Science Tools | Dumont |
Ultra Fine Forceps | Fine Science Tools | Inox #5 |
Silk Suture Thread | Ethilon | #10-0 or 9-0 |
Stereo Microscope | Olympus | Olympus SZ-11 |
Analog Video Calipers | Boeckeler | Via Controller (Via-100) |
High Resolution Analog Camera | Panasonic | GP-MF 602 |
Oxygen Tank | Regional | 21% balance nitrogen and 5% CO2 balance nitrogen |
Tubing | Tygon | |
Drain Pump | Cole Parmer Instrument Co. | |
Modified Rat PSS | See recipe below | |
Van Breemen’s Relaxant PSS | See recipe below |
Table 1. A list of the major components of isolated microvessel station setup presented in the Figures.
Modified Rat PSS Recipe | To make two liters of PSS | 20X Salt Stock (2L) | 20X Buffer Stock (2L) |
NaCl | 278.0 g | ||
KCl | 14.0 g | ||
MgSO4-7H2O | 11.5 g | ||
CaCl2-H2O | 9.4 g | ||
NaHCO3 | 80.8 g | ||
EDTA | 0.4 g | ||
NaH2PO4 | 0.28 g | ||
Glucose | 1.98 g | ||
20x Salt Stock | 100 mL | ||
20x Buffer Stock | 100 mL | ||
Distilled Water | 1800 mL |
Table 2. Recipe for standard physiological salt solution (PSS) used in the isolated microvessel protocols.
Comments on Recipe: Make 2 L of Salt Stock and 2 L of Buffer Stock. These can be refrigerated when not being used, but shake them well and often before preparing PSS. The additional ingredients are added at the time of preparation of final PSS.
Van Breemen’s Relaxant PSS | To make 2 liters of PSS | 20X Salt Stock (1L) | 20X Buffer Stock (1L) |
NaCl | 107.4 g | ||
KCl | 7.0 g | ||
MgSO4-7H2O | 5.76 g | ||
MgCl2-6H2O | 81.32 g | ||
NaHCO3 | 40.4 g | ||
EDTA | 0.2 g | ||
EGTA | 15.22 | ||
NaH2PO4 | 0.28 g | ||
Glucose | 1.98 g | ||
20x Salt Stock | 100 mL | ||
20x Buffer Stock | 100 mL | ||
Distilled Water | 1800 mL |
Table 3. Recipe for Van Breemen’s relaxant physiological salt solution (PSS) used in the isolated microvessel protocols under conditions of zero active tone.
Comments on Recipe: Make 1 L of Salt Stock and 1 L of Buffer Stock. These can be refrigerated when not being used, but shake them well and often before preparing PSS. The additional ingredients are added at the time of preparation of final relaxant PSS.