نقدم مقايسة تدفق عالية الإنتاجية cytometric لتحديد النشاط من أكلة مستضد محددة الأجسام المضادة من العينات السريرية ، وذلك باستخدام الفلورية مستضد المغلفة الخرز وخط خلية الوحيدات التعبير عن مستقبلات القطعة Fc متعددة الاستخدام توفير مستقبل والقرارات في النشاط أكلة موحدة و أزياء استنساخه عن أي مستضد من الفائدة.
وبفعل الضد يحركها البلعمة عبر إشراك مستقبلات القطعة Fc على البالعات المهنية ، ويمكن أن تساهم في إزالة الألغام على حد سواء فضلا عن باثولوجيا المرض. بينما منذ فترة طويلة من خصائص المجالات متغير من الأجسام المضادة تعتبر حاسمة لفي وظائف الجسم الحي ، أصبح من قدرة الأجسام المضادة لتجنيد الخلايا المناعية الفطرية عبر عن تقديره لهم مجالات التيسير على نحو متزايد باعتباره عاملا رئيسيا في مدى فعاليتها ، سواء في تحديد المؤتلف وحيدة النسيلة العلاج الأضداد ، وكذلك في سياق العدوى الطبيعية أو التطعيم 1-3.
الأهم من ذلك ، على الرغم من التسميات على النحو مجال المستمر ، ومجال التيسير الضد لا يملك وظيفة ثابتة ، وغير منظم بقوة فرعية مفتش (IgG1 – 4) ، وارتباط بالغليكوزيل في الهليونين 297 4-6. وبالتالي ، فإن هذا الأسلوب لدراسة الفروق الفنية للمستضد محددة الأجسام المضادة في عينات سريرية سيسهل العلاقة من وعاء أكلةential من الأجسام المضادة لحساسية المرض ، والدولة للعدوى ، والتقدم ، أو نتيجة سريرية.
علاوة على ذلك ، هذه الوظيفة المستجيب له أهمية خاصة في ضوء قدرة موثقة من الأجسام المضادة لتعزيز العدوى عن طريق توفير وصول الممرضات الى خلايا البلعمة المضيف عبر مستقبلات القطعة Fc يحركها 7. بالإضافة إلى ذلك ، هناك بعض الأدلة على أن امتصاص أكلة في مأمن من المجمعات يمكن أن تؤثر على الاستقطاب Th1/Th2 للاستجابة المناعية 8.
هنا ، نحن تصف مقايسة مصممة للكشف عن الاختلافات في البلعمة الضد التي يسببها ، والتي قد يكون سببها فرعية مفتش التفاضلية ، في هيكل غليكان Asn297 ، فضلا عن القدرة على تكوين أجسام مضادة مناعية مجمعات محددة المستضد بطريقة عالية الإنتاجية . ولهذه الغاية ، والمغلفة 1 ميكرومتر مع حبات الفلورسنت مستضد ، ثم حضنت مع عينات سريرية الأضداد ، وتوليد المستضدات محددة الفلورسنت مجمعات المناعي. هذه antiboثم يتم تحضين DY – opsonized الخرز مع خط خلية الوحيدات معربا عن FcγRs متعددة ، بما في ذلك تفعيل والمثبطة. يمكن إخراج مقايسة تشمل النشاط أكلة ، خلوى إفراز ، وأنماط استخدام FcγRs ، ونحن مصممون بطريقة موحدة ، مما يجعل هذا النظام مفيد للغاية لتحليل الاختلافات في هذه المهمة التي تعتمد على الضد المستجيب في كل من العدوى واللقاحات لحماية بوساطة 9.
في مقايسة الموصوفة هنا يسمح عالية الإنتاجية تحليل عينات من أكلة النشاط الضد السريرية باستخدام خط خلية الوحيدات استخدمت طويلا لدراسة العمليات أكلة لوحة (10) ومقرها التدفق الخلوي الآلي. هذا الاختبار هو مفيد أكثر من غيرها في قدرتها على تميز بدقة مجموعات فرعية محددة مستضد الضد ، والسماح ليس فقط لدراسة الاختلافات في البلعمة مدفوعا أضداد محددة المرض من الموضوعات المختلفة ، ولكن أيضا دراسة خصوصيات مستضد متعددة داخل نفس الموضوع. لأن الأجسام المضادة لخلايا تجنيد المستجيب الفطرية ، بما في ذلك وحيدات الخلايا الأخرى تقديم المستضد الآثار بشدة نتيجة المرض 11-13 ، ومتغيرة تبعا بيولوجيا الهندسة الضد ، مفتش فرعية ، وارتباط بالغليكوزيل Asparagine297 في المجال التيسير 14-16 ، هذا الأسلوب يتيح لل تقييم آلية الضد الحاسمة للعمل. وعلاوة على ذلك ، لأن الأجسام المضادة ميدييتم استغلالها من قبل بعض البلعمة ated مسببات الأمراض أثناء العدوى 7،17،18 ، وهذا يبشر بالخير في مقايسة تقييم عملية من الأجسام المضادة التي تعتمد على تعزيز ، ويسلط الضوء على الطبيعة المزدوجة للبلعمة باعتبارها وقائية محتملة ، يحتمل أن تكون ضارة ، وكذلك الأضداد النشاط.
ويمكن الاستفادة من مقايسة وصف لتحليل الأجسام المضادة من العينات السريرية للسكان المريض ، ولكن أيضا من يتم تطعيمهم ، ويمكن تكييفها لاستخدام المصل بدلا من مفتش المنقى. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تحليل إفراز خلوى ردا على البلعمة من طاف والثقافة ، ويمكن تحديد تأثير FCR معينة باستخدام FCR حجب الأضداد ، والسماح ليس فقط الاختلافات في القدرة أكلة يتم تحديدها ، ولكن يشير الى المصب الأحداث ، مع إلقاء الضوء في الآلية ، ويمكن أن يساعد على حل وتحسين فهم هذه الآلية المناعية.
The authors have nothing to disclose.
الكتاب نود أن ننوه بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة 3R01AI080289 – 02S1 ، وجامعة هارفارد مركز باحث زمالة أبحاث الإيدز تحت المعاهد الوطنية للصحة / NIAID 2P30AI060354 – 07.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
EZ-Link Micro Sulfo-NHS-LC-Biotinylation Kit | Thermo Scientfic | 21935 |
|
Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Unit with Ultracel-50 membrane | Millipore | UFC905024 | Filter unit size may vary according to antigen size |
FluoSpheres NeutrAvidin labeled microspheres, 1.0 μm, yellow-green fluorescent (505/515) | Invitrogen | F-8776 | Manufacturers produce this product in various colors |
Melon Gel IgG Purification Kit | Thermo | 45212 | Care should be taken to verify the purity of Ab samples by SDS-page. |