Summary

الجسيمات أسلوب التلصيق لتحديد فيروس شلل الأطفال

Published: April 20, 2011
doi:

Summary

يسمح للجسيمات الرواية وضعت مؤخرا تراص (السلطة الفلسطينية) مقايسة باستخدام جزيء الفيروس إلى تحديد مستقبلات سريعة وسهلة لفيروس شلل الأطفال (PV). في هذه المقالة ، سوف نعرض لإجراء فحص للسلطة الفلسطينية لتحديد الكهروضوئية.

Abstract

في المبادرة العالمية لاستئصال شلل الأطفال ، ومختبر التشخيص يلعب دورا حاسما من خلال عزل وتحديد الكهروضوئية من عينات البراز من الشلل الرخو الحاد (اف ب) الحالات. في منظمة الصحة العالمية (WHO) في الوقت الحاضر شبكة مختبرات شلل الأطفال ، والعزلة ، وتحديد الكهروضوئية التي يتم تنفيذها باستخدام خلية نظام الثقافة في الوقت الحقيقي وRT PCR ، على التوالي. في حقبة ما بعد القضاء على الكهروضوئية ، وتحديد إجراءات بسيطة وسريعة تكون مفيدة للتأكيد السريع لحالات شلل الأطفال في المختبرات الوطنية. في هذه الدراسة ، وسوف نعرض لإجراءات فحص رواية السلطة الفلسطينية وضعت لتحديد الكهروضوئية. ويستخدم هذا الاختبار للسلطة الفلسطينية من التفاعل جزيء الكهروضوئية (PVR) ومستقبلات الفيريون التي تقارب محددة وموحدة لجميع الأنماط المصلية الكهروضوئية. الإجراء بسيط (واحد من إجراء الخطوة رد فعل في لوحات) و (يمكن الحصول على نتائج في غضون 2 ساعة من رد الفعل) السريع ، ويلاحظ البصر نتيجة (مراقبة تراص جزيئات الجيلاتين).

Protocol

1. إعداد المتوسطة الصيانة (MM) والنمو المتوسط ​​(GM) MM لإعداد وجنرال موتورز ، الرجاء راجع دليل مختبرات شلل الأطفال في منظمة الصحة العالمية 1. Dulbecco المتوسطة لتعديل النسر (DMEM) تستكمل مع 2 ٪ مصل العجل الجنين (FCS) و 10 ٪ يمكن استخدامها ك?…

Discussion

في نقطة وحيدة من هذا الاختبار هو السلطة الفلسطينية الاستفادة من جزيء PVR بدلا من مكافحة PV الأضداد للكشف عن الكهروضوئية 2. هذا يسمح للتفاعل معينة من الجسيمات الجيلاتين مع توعية الكهروضوئية مع تقارب موحد لجميع الأنماط المصلية الثلاثة 3-6 الكهروضوئية. استخدمنا نموذ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

ونحن ممتنون لادا جونكو لمساعدتها التقنية الممتازة. ونحن ممتنون للبروفيسور أكيو Nomoto لتوفير تتكرم متجه التعبير عن الفيروسة العصوية PVR – IgG2a. وأيد هذه الدراسة في جزء من المنح التي تقدم للمساعدة في الترويج للقضاء على شلل الأطفال وبحوث الناشئة والمستجدة من الأمراض المعدية في وزارة الصحة والعمل والرعاية الاجتماعية.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Sensitized-gelatin particles Fujirebio Inc.   Test kit
Reconstitution buffer Fujirebio Inc.   Test kit
Microtitration plate Fujirebio Inc.   Test kit
Anti-PV antibody RIVM    

References

  1. World Health Organization. . Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , (2004).
  2. Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).
  3. Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. Interaction of poliovirus with its cell surface binding site. Virology. 201, 107-115 (1994).
  4. Koike, S. The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms. Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).
  5. Mendelsohn, C. Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).
  6. Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily. Cell. 56, 855-865 (1989).
  7. Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion. J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).
  8. McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor. J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).
  9. Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro. J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).
  10. Avoort, H. G. v. a. n. d. e. r. Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses. J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).
  11. Kilpatrick, D. R. Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues. J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).

Play Video

Cite This Article
Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Particle Agglutination Method for Poliovirus Identification. J. Vis. Exp. (50), e2824, doi:10.3791/2824 (2011).

View Video