Este protocolo indica cómo etiquetar retrógradamente las células ganglionares de la retina, y cómo hacer posteriormente una lesión del nervio óptico aplastar con el fin de analizar la supervivencia de células ganglionares retinianas y apoptosis. Se trata de un modelo de enfermedad experimental para los diferentes tipos de neuropatía óptica, incluyendo el glaucoma.
Abstract
La lesión del nervio óptico puede conducir a la degeneración axonal, seguido de una muerte gradual de las células ganglionares de la retina (CGR), que se traduce en la pérdida de visión irreversible. Ejemplos de tales enfermedades en humanos son la neuropatía óptica traumática y la degeneración del nervio óptico en el glaucoma. Se caracteriza por los cambios típicos en la cabeza del nervio óptico, degeneración progresiva del nervio óptico y la pérdida de células ganglionares de la retina, si no se controla, lo que lleva a la pérdida de visión y ceguera.
El aplastamiento del nervio óptico (ONC) lesión modelo de ratón es un modelo importante para la enfermedad experimental neuropatía óptica traumática, glaucoma, etc En este modelo, la lesión por aplastamiento del nervio óptico conduce a la gradual ganglionares de la retina apoptosis de las células. Este modelo de la enfermedad puede ser usado para estudiar los procesos generales y los mecanismos de muerte neuronal y la supervivencia, que es esencial para el desarrollo de medidas terapéuticas. Además, los enfoques farmacológicos y moleculares pueden ser utilizados en este modelo para identificar y comprobar el potencial de reactivos terapéuticos para tratar diferentes tipos de neuropatía óptica.
Aquí, le ofrecemos una demostración paso a paso (I) el etiquetado de referencia retrógrada de las células ganglionares de la retina (CGR) en el día 1, (II) lesión aplastamiento del nervio óptico en el día 4, (III) la cosecha de la retina y analizar la supervivencia de las CGR en el día 11, y (IV) son el resultado Representante.
Protocol
Todos los equipos y los reactivos utilizados son estériles. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Cuidado de Animales y el empleo Comisión (ACUC) en el NEI / NIH (protocolo de estudio en animales NEI-570), y se realizaron de acuerdo a las directrices del NIH y los reglamentos. 1. Etiquetado de referencia retrógrada de las células ganglionares retinianas (CGR) en el Día 1 El propósito de este procedimiento consiste en identificar a las c?…
Discussion
El aplastamiento del nervio óptico modelo murino lesión es útil para estudiar el proceso de la muerte de las CGR y la supervivencia. Este modelo también se utiliza a menudo para investigar los efectos de diferentes reactivos y los genes de la apoptosis y la supervivencia de las CGR. Una de las ventajas de este modelo es que tiene un alto grado de reproducibilidad con variaciones mínimas.
Sin embargo, se requiere un cuidado especial en varias etapas en este modelo. En primer lugar, la ho…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nuestra investigación es apoyada por el Programa de Investigación Intramural del NIH, el Instituto Nacional del Ojo.