Biz autoinflammatory fenotipleri ile başvuran hastalarda, IL-1 beta üretim gibi pro-inflamatuar sitokinlerin üretimi, ölçmek için basit bir immunoassay açıklar. Özellikle lipopolisakkarid patojen ilişkili moleküler paternleri, tam kan kültürlerinde hücreleri aktive ederek, sitokin salgılanması tam kan Süpernatantları rahatlıkla değerlendirilebilir.
İnflamatuar süreçleri, bağışıklık hücreleri tarafından çözünür mediatörlerin salgılanmasını kaynaklanan cilt, eklemler ve diğer dokular gibi değişmiş sitokin homeostazı çeşitli tezahürleri yol. Doğuştan gelen bağışıklık sistemi, patojenler ve diğer endojen tehlike uyaranlara tanıma çok önemli bir rol oynar. Doğuştan gelen bağışıklık hücreleri tarafından yayımlanan önemli sitokinlerin biri İnterlökin (IL) -1. Bu nedenle, inflamatuvar sitokinlerin salgılanmasını ölçmek için ve özellikle pro-inflamatuar sitokin IL-1β 1, 2, 3, tam kan stimülasyon tahlil kullanmaktadır.
Autoinflammatory sendromlar neden olan doğuştan gelen bağışıklık sisteminin genetik işlev bozuklukları olan hastalar sadece LPS ile uyarılması üzerine IL-1β olgun abartılı bir sürümü göstermektedir. Doğuştan gelen bağışıklık bileşeni ile ilişkili inflamatuar patolojileri ile başvuran hastaların değerlendirilmesi amacıyla, gram-negatif bakteriyel endotoksin gibi patojen ilişkili moleküler kalıplarını (PAMPs), hücresel immün yanıtları tespit etmek için belirli bir immunoassay, lipopolisakkarit (LPS .) Bu PAMPs, doğuştan gelen bağışıklık sistemi 4, 5, 6, 7 hücreleri üzerinde bulunan patojen tanıma reseptörleri (PRRs) tarafından kabul edilmektedir . Ile birlikte ikincil bir sinyal, ATP, inflammasome, olgun, biyoaktif formda 4, 5, 6, 8, 9 pro-IL-1β işlediği bir multiprotein kompleksinin aktivasyonu için gerekli bir temel sinyal, LPS, 10
Tam kan tahlil belirli hücre popülasyonlarının emek yoğun izolasyon ve kültür gerektiren diğer yöntemleri ile kıyaslandığında sitokin üretimini değerlendirmek için minimum numune manipülasyon gerektirir. Bu yöntem diğer tüm kan stimülasyon testleri farklıdır; RPMI medya oranına sahip numunelerin seyreltilmesi daha ziyade, bir beyaz kan hücresi doğrudan seyreltilmiş tam kan sayımı ve bu nedenle, kültür 2 beyaz kan hücrelerinin sayısı bilinen bir teşvik gerçekleştirmek. Özellikle tüm bu kan testinin sonuçları autoinflammatory pathophysiologies ile başvuran hasta kohortlarında nedenlerine açıklık kullanışlı yeni bir teknik ortaya koymaktadır.
Açıklanan tüm kan testi, hücre izolasyonu ve geniş bir örnek işleme ve manipülasyon gerektirir diğer tekniklere göre daha fizyolojik koşulları yakından taklit eden basit bir yöntem. Bu yöntem, beyaz kan hücrelerinin tüm kan sayımı ve bu nedenle, doğru hücre sayıları dayalı örnekleri standartlaştırmak için bir yol sağlar AO ile Cellometer Vizyon kullanır.
Bu testte, tam kan, diğer antikoagülanlar kalsiyum şelatlar bilinen sodyum heparin toplama tüpleri içine…
The authors have nothing to disclose.
Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri Artrit ve Kas-iskelet ve Cilt Hastalıkları Ulusal Enstitüsü İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Sodium Heparin Blood Collection Tubes | BD | 366480 | ||
RPMI 1640 Media | GIBCO | 21870-100 | ||
Acridine Orange | Invitrogen | A3568 | ||
Cellometer Vision | Nexcelom Bioscience | Contact company for instrument information | ||
Cellometer Cell Counting Chambers | Nexcelom Bioscience | CHT4-SD100 | ||
24-well Tissue Culture Plate | Corning Costar | 3524 | ||
Ultra Pure E. coli K12 LPS | InvivoGen | tlrl-eklps | ||
Adenosine 5´-tripohasphate disodium salt hydrate | Sigma-Aldrich | A26209 | ||
Bio-plex 200 system | Bio-Rad | Contact company for instrument information | ||
Bio-Plex Pro human cytokine x-plex assay | Bio-Rad | x-plex assays are custom made according to specified cytokines of interest |