효모에서이 프로토콜에서 유전자 발현 (<em> Saccharomyces cerevisiae</em>) 변경 과산화수소의 추가 (H에 의해 유도된 산화 스트레스에 노출 후<sub> 2</sub> O<sub> 2</sub>), 산화 요원.
이 프로토콜에서는 효모 (Saccharomyces cerevisiae의)에서 유전자 발현이 변경됩니다 과산화수소의 추가 (H 2 O 2), 산화 대리인에 의해 유도된 산화 스트레스에 노출 후. 실험에서 효모는 배 포도당을 포함한 1/2X YPD의 국물에 48 시간 동안 성장합니다. 문화 제어 및 치료 그룹으로 분할됩니다. 실험 문화 0.5 MM 행크스의 H 2 O 2 치료하면 1 시간 (HBSS) 살린 버퍼. 컨트롤 문화는 HBSS로 처리됩니다. 총 RNA는 두 문화에서 추출되고 다단계 프로세스를 통해 비오틴 – 표시 cRNA 제품으로 변환됩니다. 최종 합성 제품은 UVM Microarray 핵심 설비로 이동 및 Affymetrix의 효모 GeneChips에 hybridized입니다. 그 결과 유전자 발현 데이터는 생물 정보학 데이터 분석 소프트웨어로 업로드됩니다.
The authors have nothing to disclose.
General Laboratory Equipment | Company | Product number |
Spetrophotometer | ||
Thermocyler | ||
Microcentrifuge | ||
Vortex | ||
Stir Plates (2) | ||
P-10s pipettors | ||
P-20’s pipettors: | ||
P-200’s pipettors: | ||
P-1000’s pipettors: | ||
Camera and transilluminator | ||
Supplies – recommended | ||
E-Gel Apparatus | Invitrogen | G6000-08 |
E-Gels | Invitrogen | G6018-02 |
Axygen 1.7 ml. Clear | Krackler | 383-MCT175C |
Axygen 0.5 ml clear tubes | Krackler | 383-MCT060C |
Axygen 2ml capture tubes | Krackler | 383-MCT200NC |
boxes of P-10 ART tips: | CLP | BT10XL |
Boxes of P-100 ART tips: | CLP | BT200 |
Boxes of P-20 ART Tips: | CLP | BT20 |
Boxes of P-1000 ART Tips: | CLP | BT1000 |
Yeast Chips | ||
General Laboratory Supplies | ||
25 ml sterile disposable pipets- | ||
5ml sterile disposable pipets- | ||
Microfuge tube racks | ||
KimWipes: | ||
Lab Coats | ||
Stir Bars | ||
Culture flasks | ||
Innoculating loops | ||
Sharpies | ||
Gloves | ||
Autoclave tape | ||
Stirrer bars | ||
Reagents | ||
30% Hydrogen Peroxide | EMD Millipore | 386790 |
HBSS without Ca, Mg, or dye | Sigma-Aldrich | H6648-100ml |
Qiagen Rneasy Mini Kit: | Qiagen | 74104 |
Qiagen DNase Kit: | Qiagen | 79254 |
Rnase Remover | Denville Scientific | D1180 |
Harleco Alcohol 100% | EMD Millipore | 65347 |
ENZO IVT Kit | ENZO | ENZ-42655-10 |
Lyticase: one bottle | VWR | IC19012310 |
Water, Cell Culture grade | EMD Millipore | 4.86505 |
Yeast culture: | ATCC | 18824 |
YPD broth powder | EMD Millipore | 4.8504 |
D(+) Glucose, Anhydrous | EMD Millipore | 346351 |
Sorbitol | EMD Millipore | 56755 |
EDTA | EMD Millipore | 4005 |
SDS solution, 20% | EMD Millipore | 7990-OP |
Pellet Paint | EMD Millipore | 69049 |
PCI RNase DNase free (7 aliquots): | Fisher | AC32711-500 |
7.5M NH4OAc | Fisher | ICN1987 5980 |
Fragmentation Buffer (200 mM Tris-Acetate, pH 8.1, 500 mM KOAc, 150 mM MgOA) | ||
Trizma Base | Fiaher | 50-899-90034 |
KOAc | Fisher | NC9757725 |
MgOA | Fisher | NC9681042 |
Loading Dye | Invitrogen | 10482055 |
PCR Markers | EMD Millipore | 69278-3 |
Phase Lock Gels | Fisher | FP2302820 |
One-Cycle cDNA Kit | Invitrogen | A10752-030 |
Includes; | ||
E. coli DNA Pol | ||
dNTP’s | ||
T4 DNA Pol. | ||
T-7 oligod(T) | ||
0.5ml EDTA pH 8.0 | ||
First Strand Buffer | ||
E. Coli RNaseH | ||
Second Strand Buffer | ||
E. Coli DNA ligase | ||
SuperScript II | ||
DTT |