Лайма исследования медицинских исследований часто требуют поколения клещей инфицированы возбудителем Borrelia burgdorferi, процесс, который обычно занимает несколько недель. Здесь мы показываем, микроинъекции основе тик инфекции процедура, которая может быть выполнена в течение нескольких часов. Мы также продемонстрировать метод иммунофлюоресценции на месте локализации B. burgdorferi в клещи.
Болезнь Лайма вызывается инфекцией с спирохеты Borrelia burgdorferi возбудителя, который ведется в природе клещей грызунов инфекционного цикла 1. Клещевого мышиной модели 2 был разработан для изучения болезни Лайма в лаборатории. Хотя наивная клещи могут быть заражены B. burgdorferi путем подачи их на зараженных мышей, линьки процесс занимает от нескольких недель до месяцев. Таким образом, разработка более быстрой и эффективной тик инфекции методы, такие, как микроинъекции основе процедуры, является важным инструментом для изучения болезни Лайма 3,4. Процедура требует лишь несколько часов для получения инфицированных клещей и позволяет контролировать доставку равные количества спирохет в когорту клещей. Это особенно важно, как и поколение B. burgdorferi инфицированных клещей на естественный процесс кормления на мышах не обеспечивает 100%-ная ставка инфекции и, возможно, приводит к изменению нагрузки возбудителя среди клещей кормили. Кроме того, микроинъекции может быть использована для заражения клещей с Б. burgdorferi изолятов в тех случаях, когда штамм ослабленных не может установить инфекции у мышей и, следовательно, не может быть естественным, приобретенных клещей 5. Этот метод может также использоваться для доставки множества других биологических материалов в клещи, например, специфические антитела или двухцепочечной РНК 6. В этой статье мы покажем, микроинъекции нимф клещей с в пробирке выращенных B. burgdorferi. Мы также будем описывать метод локализации болезни Лайма патогенных микроорганизмов в кишечнике клеща с помощью конфокальной микроскопии иммунофлуоресценции.
Здесь мы показываем, микроинъекции основе процедуры для быстрого и эффективного заражения нимф иксодовых клещей с бактериальным возбудителем B. burgdorferi. Мы также описываем конфокальной иммунофлюоресценции процедура выявления B. burgdorferi в тик кишки на месте. Хотя наша демон…
The authors have nothing to disclose.
Мы искренне благодарим членов лаборатории Пал за помощь в подготовке этой демонстрации. Это исследование было поддержано грантами PHS AI076684 и AI080615 из NIH / NIAID.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Glass capillary tubes | World Precision Instruments | TW100F-4 | ||
Vertical glass puller | Narishige | PC-10 | ||
Petroff-Hausser counting chamber | Hausser scientific | 3900 | ||
Microloader pipette tips | Eppendorf | 930001007 | ||
Femtojet microinjector | Eppendorf | 920010504 | ||
Foot control FemtJet | Eppendorf | 920005098 | ||
Phosphate buffered saline | Fisher Scientific | BP665-1 | Filter-sterilized |