在这篇文章中,我们描述了鉴定的腺相关病毒血清型3(AAV3)针对人肝癌细胞的最有效的载体。
重组载体的非致病性的人类细小病毒,腺相关病毒(AAV2)已经开发,目前正在使用的基因治疗临床试验。最近,一些额外的腺相关病毒血清型也被孤立,这已显示出各种小型和大型的动物模型 1的选择性组织向性。 10个最常用的腺相关病毒血清型,AAV3是目前效率最低的,在体外以及体内转导的细胞和组织。
然而,我们最近发表的研究报告,我们已经证明AAV3载体转导人肝癌 – 肝母细胞瘤(HB)和肝细胞癌(HCC) – 细胞株非常有效,因为AAV3利用人肝细胞生长因子受体细胞作为有约束力的共同受体并在这些细胞中的条目 2,3 。
在这篇文章中,我们描述,以实现高效率的重组AAV3携带报告基因的载体转导人肝癌细胞所需的步骤。重组AAV3携带治疗基因的载体的使用,最终可能导致潜在的人类基因治疗肝癌。
非致病性人类细小病毒,腺相关病毒(AAV)为基础的重组载体已发展起来的,目前在基因治疗临床试验5使用。此前,10个最常用的腺相关病毒血清型,一般的AAV3载体的转导效率已报道在体外 和体内1,要特别低。然而,我们最近的观察,AAV3载体转导人肝癌细胞系得非常好,决定由流式细胞仪 2定量,AAV3利用人肝细胞生长因子受体(hHGFR的细胞作为一个具有约束力,并在这些条目的共同受体)细胞3,强烈建议,特别是有选择性的AAV3组织,嗜在一般人的肝细胞,人肝癌细胞。然而,由于AAV3载体,也有效地转导人体正常肝细胞2, 其在体内的癌基因治疗中的应用潜力将受到负面影响。一个可能的策略来规避这种潜在的问题涉及转录针对癌细胞通过确定一个基因的产物,是有选择性的肿瘤产生,但不正常的肝细胞。例如,以往的研究表明,血清α-甲胎蛋白(AFP)作为一个跟踪的存在,进展和/或某些类型的肝癌再次发生的具体标记,因为正常的肝细胞产生极少量的一般这种蛋白质。事实上,我们已经使用了AAV3含AFP启动,目标在肝癌细胞中的转基因表达的载体,但不是在正常的肝细胞,研究目前正在进行中,测试了肝癌的小鼠移植瘤模型这种方法的疗效。在我们进一步的研究中,我们所观察到的表面暴露在6-14病毒衣壳蛋白的酪氨酸残基的定点突变,不同的腺相关病毒血清型载体转染效率可显着增强。自6 7表面暴露的酪氨酸也AAV3保守,我们这些残余物的定点诱变和酪氨酸突变AAV3载体的转导效率明显增强人肝癌细胞(未发表数据)。研究目前正在进行评价其安全性和酪氨酸突变AAV3载体在小鼠移植瘤模型,为人类肝母细胞瘤和肝细胞癌的疗效,如果成功的话,最佳的酪氨酸突变AAV3血清型载体可能被证明是针对人体肝脏为潜在的基因治疗的癌症。
The authors have nothing to disclose.
我们感谢博士。 R.裘德Samulski和小肖重组AAV3和AAV – EGFP的质粒,分别和盖尔汤林森博士的那种慷慨地提供Hep293TT细胞的礼物。这项研究是支持公共卫生服务补助金补助R01 HL – 076901,R01 HL – 097088,和P01 DK – 058327从美国国立卫生研究院(项目1)(AS)的一部分。
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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DMEM | Cellgro | 10-0170CM | ||
PEI | Polysciences | 23966 | ||
Benzonase | Novagen | 70664-3 | ||
HiTrap Q HP column | GE Healthcare | 17-1154-01 | ||
Salmon sperm DNA | Fisher | NC9753983 | ||
Iodixanol gradient | OptiPrep | 1114542 | ||
G-50 Columns | GE Healthcare | 27-5330-01 |