Transformation von Plasmid-DNA in E. coli mit dem Hitzeschock-Methode

Abstract

Transformation von Plasmid-DNA in E. coli mit dem Hitzeschock-Methode ist eine grundlegende Technik der Molekularbiologie. Es besteht aus ein fremdes Plasmid oder Ligationsprodukt in Bakterien. Dieses Video-Protokoll beschreibt die traditionelle Methode der Transformation mit Hilfe von kommerziell erhältlichen chemisch kompetente Bakterien aus Genlantis. Nach einer kurzen Inkubation in Eis, ist eine Mischung aus chemisch kompetente Bakterien und DNA bei 42 ° C für 45 Sekunden gesetzt (Hitzeschock) und anschließend wieder in Eis gestellt. SOC-Medium zugegeben und die transformierten Zellen werden bei 37 ° C für 30 min unter Rühren inkubiert. Um zu isolieren Kolonien unabhängig von Transformationseffizienz gesichert werden, sind zwei Mengen von transformierten Bakterien überzogen. Das traditionelle Protokoll erfolgreich eingesetzt werden kann auf die meisten handelsüblichen kompetente Bakterien zu transformieren. Die turbocells aus Genlantis kann auch in einem Roman 3-Minuten-Transformation-Protokoll, in der Bedienungsanleitung beschrieben verwendet werden.