Preparación y Cultura de rebanadas de pollo tronco cerebral auditivo
Summary
El tronco cerebral auditivo pollo se compone de los núcleos responsables de procesamiento de sonido binaural. Una preparación simple corte coronal mantiene el circuito completo, mientras que el enfoque de cultivo proporciona una preparación única para estudiar el desarrollo de la estructura neuronal y la función auditiva en los niveles molecular, celular y de red.
Abstract
El tronco cerebral auditivo de pollo es un modelo de sistema bien establecido que ha sido ampliamente utilizado para estudiar la anatomía y la fisiología del procesamiento auditivo en los períodos discretos de desarrollo 4.1, así como los mecanismos de codificación temporal en el sistema central nervioso 7.5.
Aquí presentamos un método para preparar el pollo rodajas del tronco cerebral auditivo que puede ser utilizado para la aguda procedimientos experimentales o rodajas de cultivo organotípico a largo plazo de las manipulaciones experimentales.
El tronco cerebral auditivo pollo se compone de angularis núcleo magnocelular de oliva, laminaris y superior. Estos núcleos son los responsables de procesamiento de sonido binaural y solo los preparativos corte coronal preservar el circuito entero. En última instancia, cultivos organotípicos rebanada puede proporcionar la oportunidad de manipular varios parámetros de desarrollo, tales como la actividad sináptica, la expresión de los componentes de pre y post-sináptica, la expresión de la excitabilidad de los aspectos de control y la expresión diferencial de genes
Este enfoque puede ser utilizado para ampliar el conocimiento general sobre el desarrollo de circuitos neuronales, el refinamiento y la maduración.
Protocol
Discussion
Durante varias décadas, la preparación rebanada aguda del tronco del encéfalo de pollo se ha utilizado para el estudio del procesamiento auditivo 9, 10. Este enfoque ha proporcionado una enorme cantidad de datos in-vitro fisiológicos en el procesamiento binaural de ambos estados de desarrollo y de madurez 4, 11, 12. Se sabe mucho sobre este circuito de alta especialización y el papel que juega cada núcleo en el procesamiento temporal del sonido 13, 14. De hecho, a corto pl…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Rubel miembros actuales y anteriores de laboratorio.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Chicken ACSF | ||||
| NaCl | Fisher Scientific | M-11624 | 130 mM | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | M-10576 | 26 mM | |
| KCl | Sigma | P-9333 | 3 mM | |
| NaH2PO4 | Sigma | S-8282 | 1.25 mM | |
| Glucose | Sigma | G-7528 | 10 mM | |
| MgCl2 | Fisher Scientific | M33-500 | 1 mM | |
| CaCl2 | Acros Organics | 423525000 | 2 mM | |
| Chicken culture medium (store at 4°C) | ||||
| advanced minimum essential medium (with NEAA, sodium pyruvate at 110 mg/l, without L-glutamate) | Gibco Invitrogen | 12492-013 | 48.00% | |
| Earl’s balanced salt solution | Sigma | E-2888 | 24.00% | |
| L-glutamine (200 mM) | Sigma | G-7513 | 1.00% | |
| Glucose solution (200 g/l, sterile filtered) | Sigma | G-7528 | 2.75% | |
| horse serum (heat inactivated, sterile filtered) | Sigma | H-1138 | 24.00% | |
| Penicillin-streptomycin* | Sigma | P-0781 | 1.00 ml * = Add to 100 ml culture medium if needed to prevent contamination |
|
| Specific equipment | ||||
| Millicell-CM cell culture inserts | PICMORG50 | Millipore | ||
| 6-well plate | 6 Well Cell Culture Cluster | Corning Incorporated | ||
| Incubator | Forma Scientific CO2 Water Jacketed Incubator | Forma Scientific |
References
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