Whole Cell Recordings von Brain of Adult Drosophila
Summary
Dieses Video zeigt das Verfahren zur Isolierung von ganzen Gehirnen von adulten Drosophila in Vorbereitung für die Aufnahme von einzelnen Neuronen mit Standard ganzen Zelle-Technologie. Es enthält Bilder von GFP-markierten Zellen und Neuronen während der Aufnahme angesehen.
Abstract
In diesem Video zeigen wir, das Verfahren zur Isolierung von ganzen Gehirnen von adulten Drosophila in Vorbereitung für die Aufnahme von einzelnen Neuronen. Wir beginnen mit einer Beschreibung der Anatomie-Lösung und der Einnahme der erwachsenen Frauen in unseren Studien verwendet. Das Verfahren für das Entfernen der gesamten Gehirns intakt, sowohl Sehlappen, dargestellt. Dissection der darüberliegenden Luftröhre wird ebenfalls angezeigt. Das isolierte Gehirn ist nicht nur klein, sondern braucht besondere Pflege im Umgang mit in dieser Phase, um Schäden an den Nervenzellen zu verhindern, von denen viele in der Nähe der äußeren Oberfläche des Gewebes. Wir zeigen, wie eine spezielle Halterung haben wir benutzt, um das Gehirn in der Aufnahme Kammer zu stabilisieren. Ein Standard-Elektrophysiologie Einrichtung für die Aufnahme von einzelnen Neuronen oder Paaren von Neuronen verwendet wird. Ein fluoreszierendes Bild, durch die Aufnahme Mikroskop betrachtet, aus einer GAL4 Linie fahren GFP-Expression (GH146) zeigt, wie Projektion Neuronen (PNs) in der Live-Gehirn identifiziert. Eine hohe Leistung Nomarski Bild zeigt eine Ansicht eines einzelnen Neurons, die für ganze Zelle Aufnahme wird angestrebt. Wenn das Gehirn erfolgreich ist ohne Beschädigung entfernt werden, sind die Mehrheit der Neuronen spontan aktiv, feuern Aktionspotentiale und / oder ausstellen spontane synaptische Eingang. Diese in-situ-Herstellung, in der ganzen Zelle die Aufnahme von identifizierten Neuronen in das gesamte Gehirn mit genetischen und pharmakologischen Manipulationen kombiniert werden können, ist ein nützliches Modell für die Erkundung zellulären Physiologie und Plastizität im adulten ZNS.
Protocol
Discussion
Die isolierte ganze Gehirn Vorbereitung illustrieren wir in diesem Video ermöglicht die Beurteilung der zellulären Mechanismen, die Erregbarkeit und synaptische Übertragung in identifizierten Neuronen, einschließlich derjenigen in den olfaktorischen Verarbeitung Wege, in der erwachsenen Drosophila Gehirn (Gu und O Dowd, 2006). Dieser Ansatz ist komplementär zu der neuronalen Aktivität im Gehirn der intakten, erwachsenen Drosophila (Wilson et all 2004) Studie, in der gleichen Weise Aufnahmen von Neuronen im Gehirn von Säugetieren Sche…
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch ein NIH NS27501 zu DKOD unterstützt. Zusätzliche Unterstützung für diese Arbeiten wurde durch eine HHMI Professor Programm Grant DKOD zur Verfügung gestellt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| #5 Foceps | Tool | FST by DUMONT | No. 11251-10 | Be careful, never damage the fine tips of forceps |
| Papain | Reagent | Worthington | 3126 | 20 U/ml activated by 1 mM L-cysteine |
| Dissecting microscope | SMZ-2B Model:C-PS | Nikon | Equipped with gooseneck fiber optic lights positioned a low angle | |
| Needle & Syringe | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Cheap and durable | |
| Upright microscope | Axioskop2 FS plus | Zeiss | Equipped with a fixed stage, 40X water immersion objective, Nomarski optics, and fluorescent lamp | |
| Patch clamp amplifier | 200 B | Molecular device | ||
| Digidata D-A converter | 1322A | Molecular device |
References
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal lobe. Science. 303, 366-370 (2004).
