此协议是一个成本效益的替代方案,为高效的并行澄清和质粒DNA纯化<em> E。大肠杆菌</em>文化。 AcroPrep发展的过程开始于一个优化的裂解液澄清过滤净化结合能力高的DNA结合滤板的车牌。
我们描述AcroPrep提前96个质粒的准备滤板的完整的过程,从原核文化,并以高纯度的DNA结尾。基于多井过滤细菌裂解液检查和DNA纯化,这种方法创建一个质粒编制的精简过程。含有硅为基础的媒体的过滤板可以很容易地处理,真空过滤或离心产生可观数量的质粒DNA。定量分析确定纯化的质粒DNA是高品质的一贯平均OD 260/280比值1.97 。总体而言,质粒产量提供更纯净的DNA测序和克隆,下游应用,如。这种简化方法采用AcroPrep提前滤板允许手动,半自动或全自动化处理。
我们描述了一个浅显的,精简AcroPrep提前滤板的协议,给予几个优点。在手工,半自动化或全自动化AcroPrep提前格式的处理时,这种方法提供了最大的质粒DNA产量。对裂解间隙板的集成预过滤,提供样品,即使是那些含有较高水平的微粒过滤一致。更快,更均匀,整个板块的滤过率,以最小的滞留量板的结果以及几何;和出口尖几何提供了直接到接收板样品流,无交叉污染的关注。更重要的是,高的DNA结合能力AcroPrep预先过滤板具有约束力板膜是优化高质量的质粒DNA的最大恢复。
The authors have nothing to disclose.