כדי לטפח גזע עצביים לפסגה תאים (NCSC) במבחנה, בינוני מיוחד (NCSCM) נדרשת. חלק חיוני של NCSCM הוא עובר אפרוח לחלץ (CEE). כאן אנו מתארים טכניקות מדויקות כדי לייצר כמות מוגדל של איכות CEE טהור גבוהה, כולל פרטים כמו בידוד, מסמוס, צנטריפוגה, תהליכי סינון.
Abstract
הרכס העצבי נובעת האאקטודרם נוירו במהלך embryogenesis ואת נמשכת רק באופן זמני. ניסויים מוקדמים כבר proofed ובתאים pluripotent להיות חלק אינטגרלי של הרכס העצבי 1. Phenotypically, בתאי גזע עצביים לפסגה (NCSC) מוגדרים בו זמנית על ידי הבעת p75 (נמוך המאוחד גורם גדילה עצבי קולטן, LNGFR) ו SOX10 במהלך הנדידה שלהם מן הרכס העצבי 2,3,4,5. אלה ובתאים יכולים להתמיין לתאי שריר חלק, chromaffin התאים, נוירונים ותאי גלייה, כמו גם מלנוציטים, סחוס ועצם 6,7,8,9. כדי לטפח NCSC במבחנה, גזע מיוחד הרכס העצבי בינוני תא (NCSCM) נדרש 10. החלק המורכב ביותר של NCSCM היא הכנת תמצית חומוס העובר (CEE) המייצג מקור חיוני של גורמי גדילה עבור NCSC כמו גם עבור סוגים אחרים של explants עצביים. מרכיבים אחרים NCSCM ליד CEE זמינים מסחרית. הפקת CCE באמצעות ציוד מעבדה סטנדרטי יש חשיבות גבוהה לדעת את הפרטים מאתגר כמו בידוד, מסמוס, צנטריפוגה, תהליכי סינון. בפרוטוקול זה אנו מתארים טכניקות מדויקות כדי לייצר כמות מוגדל של איכות CEE טהור גבוהה.
Protocol
המדינה המחברים כי ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם הקהילות האירופיות Council Directive (86/609/EEC), בעקבות הנחיות של NIH לגבי טיפול השימוש בבעלי חיים הפרוצדורות והתקנות שנקבעו על ידי בעלי חיים המוסדי טיפול השתמש הוועדה (IACUC) באוניברסיטת דואיסבורג-אסן (גרמניה). <p class="jove_title" style=";text-al…
Discussion
פרוטוקול זה מבוסס על שינויים של נהלים אשר תוארו 10,11 האחרונות. בנוסף לפרסומים לשעבר אנחנו כאן להראות את השלבים השונים של תהליך אישי מורחב יותר. זו תומכת הנסיין עם פרטים חשובים להבטחת ההליכים הנכונים תוצאות אמינות. יתר על כן, כאשר תהליך הניתוח הוא חלק חיוני להפקת C…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
התמיכה והייעוץ של מרקוס Pajtler ורוברט Bohrer היו שלא יסולא בפז עבור להדמיה של פרוטוקול זה.
Pajtler, K., Bohrer, A., Maurer, J., Schorle, H., Schramm, A., Eggert, A., Schulte, J. H. Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells. J. Vis. Exp. (45), e2380, doi:10.3791/2380 (2010).