1. Giriş Kerevit hindgut en son kapsamlı bir genel bakış serotonerjik modülasyon ve innervasyon (Musolf ve ark, 2009 öncelikle odaklı Dr. Barbara E. Musolf, (2007, Georgia State Üniversitesi, Atlanta, Georgia, ABD), bir tez uyulması .) Kabuklu hindguts ilk Alexandrowicz, karşılaştırmalı anatomi, onların innervasyon çeşitli yönlerini açıklanan öncü (Alexandrowicz 1909) 100 yıl önce incelendi. Araştırma, tüm hayvan ozmoregülasyon hindgut genel işlevi adresleme ve (bkz. gözden tarafından Musolf, 2007) çeşitli bileşikler tarafından hindgut kontraktilite modülatör kontrolü inceleyerek, kas tabakaları ve mimari türleri tanımlayarak, yıllar boyunca devam etti. Hindgut anal kısmı dışkı dışarı atmak için değil, aynı zamanda çevre için ozmoregülasyon su çekmek için sadece hareket ettiğini not etmek ilginçtir. Gut bu bölgede öne geçmesi ya da hayvanın ihtiyaçlarına bağlı olarak peristaltizm ters. Alexandrowicz (1909), kabuklu hindgut, iç pleksus ve daha sonra belirlenmesi ve karakterize nörotransmitterlerin için zengin kaynaklar olduğunu kanıtladı bir dış pleksus, iki sinir innerve plexuses belirledi. 1950 Dr. Ernst Florey kerevit hindgut farmakolojik çalışmalar bir dizi başladı ve kasılmaları, asetilkolin ve ilgili bileşikler ve aynı zamanda epinefrin ve norepinefrin (Florey 1954) tarafından modüle olduğunu göstermiştir. Florey, kaşifi "olarak bilinen bir inhibitör madde Faktör-I", kerevit gastrointestinal sistem (Florey 1961) de dahil olmak üzere çeşitli hazırlıklar, bu maddenin etkilerini inceledi. Faktör-Daha sonra GABA olduğu gösterilmiştir. Böylece, kerevit hindgut sinaptik inhibisyonu ilk çalışmalarda önemli bir rol oynadı. GABA keşfedilmesinden sonra, diğer olası vericileri hindgut plexuses ile ilişkili olduğu gösterildi ve fizyolojik tepkiler. Iki orcokinin peptidler (NFDEIDRSGFGFN ve AFDEIDRSGFGFN; Bungart ve arkadaşları 1994;. Dircksen ve ark 2000); (Mercier ve ark 1997 RYLPG-OH), proctolin Böyle vericileri dopamin (Elofsson ve ark 1968. Elekes ve ark 1988) , orcomyotropin (FDAFTTGFamide; Dircksen ve ark, 2000) ve bir myosuppressin peptid (Mercier ve ark 1997;. pQDLDHVFLRFamide büyük olasılıkla, cf Stemmler ve ark 2007) . Bu maddelerin her biri, spontan hindgut kasılmaları modüle ve GABA dışındaki tüm eksitatör gibi görünüyor. Hindgut glutamat ve quisqualate (Jones, 1962; Yanlış ve ark 2003) cevap verir, ama glutamaterjik innervasyon için açık bir kanıt bildirilmemiştir. Çeşitli vericilerinin etkileri arabuluculuk intrasellüler haberciler büyük ölçüde keşfedilmemiş, fakat kasılmaları (Knotz & Mercier, 1995) artırmak için dopamin yeteneği cAMP katılımı için bir kanıt yoktur. Kabuklu hindgut denervasyon sonrası kendiliğinden sözleşmeleri olmasına rağmen, bu tür kasılmalar genellikle zayıf ve düzensiz (Winlow & Laverack, 1972a Galler, 1982). Peristaltik hareket, görünüşte son karın ganglion (Winlow & Laverack, 1972a, b, c) menşeli, merkezi sinir sistemi koordine motor çıkışı gerektirir. Kerevit, motor çıkışı hücre gövdeleri son karın ganglion (Kondoh & Hisada, 1986) lokalize 75 aksonlar içeren 7. karın kök, hindgut yapılır. En azından bazı peptidlerin son karın ganglion (. Mercier et al 1991b; Dircksen ve ark 2000 Siwicki & Bishop, 1986) menşeli nöronlardan gelen hindgut pleksus temin edilecek görünür, ancak dopamin Daha fazla nöron tarafından sağlanan ön ganglionlar (Mercier ve ark. 1991a). 7. karın kök yoluyla motor çıkışı büyük, koordineli kasılmaları için gerekli olduğundan, yukarıda listelenen varsayılan vericileri bir kısmını veya tamamını peristaltizm bir şekilde katkıda bulunduğu muhtemeldir. Ancak, onların göreceli katkıları bilinmemektedir. Ayrı ayrı dairesel ve uzunlamasına kas (Mercier & Lee, 2002) üzerindeki etkilerini inceleyerek bazı bilgiler elde edilebilir. Sindirilmemiş gıda hareketini kontrol etmeye ek olarak, kabuklu hindgut ile ilişkili sinir pleksus döküm ile ilgili önemli bir endokrin fonksiyonu oynamak için görünür. Hindgut Carcinus maenas, yengeç, su alımı bir rolü olduğunu düşündürür ve döküm ile ilişkili şişme, ecdysis (Webster ve ark 2000) sırasında kabuklu hiperglisemik hormon ve ilgili habercisi peptid serbest endokrin hücreler içerir. Böylece, kabuklu hindgut birçok önemli fizyolojik süreçleri dahildir. Bu rapor, öncelikle gelişmiş yüksek okul ve deneylere katılan fizyoloji kursları lisans öğrencileri için bir eğitim aracıdır. Önemi yanı sıra, hindgut sözleşmeleri ve işlevleri öğrenciler tarafından nasıl ele alınabilir arkasında olası bir mekanizma. Farmakolojik ajanların, nörotransmitterlerin ve lobu olacak ve doz-yanıt eğrileri, fizyolojik ve farmakolojik veri almak ve nasıl yorumlamak için öğrencilerin meşgul olan, inşa edilecek. Reseptör fonksiyonu agonistleri ve antagonistleri ile ilgili genel bir anlayış da elde edilebilir. Öğrenciler ayrıca, istatistiksel analiz için grafik biçiminde verileri sunmak için öğreneceksiniz. Kerevit hindgut kasılmaları incelemek ve kaydetmek için çok kolaydır. Disseke hazırlanmasında, bağırsak kolayca eksojen maddelere maruz kalmaktadır. Peristaltik aktivite değişiklik görsel veya bir kuvvet dönüştürücü, kasılmaların gücü de izleyebilirsiniz ile izlenebilir. Çünkü biyoassay hazırlık olarak, basitlik ve güvenilirlik, kerevit hindgut hala peristaltizm, motor çıkış ve kas kasılması modülasyonu ve reseptör fonksiyonu mekanizmaları hakkında pek çok araştırma soruları araştırmak için çok yararlıdır. Hindgut eylemleri belirli mekanizmaları test böcek, crustaceancides ve kirleticiler için de yararlıdır. 2. Yöntemleri 2.1) Malzeme kerevit kerevit salin diseksiyon aletleri (kaba ve ince makas, kaba ve ince forseps) Sylgard oturaklı Petri kabı çelik diseksiyon pimleri bardak (kimyasal solüsyonlar tutun) parafilm (çözümler kapsayan ve karıştırma için) 2.2) Diseksiyon Kerevit (Procambarus clarkii) vücut uzunluğu ölçme 6-10 cm diseksiyonu başlamadan önce hayvan uyutmak için 5 ila 10 dakika buz konulmalıdır. Anestezi kerevit pençeleri arkasından tek elle tutun. Çabuk, göz yuvası, her iki tarafta baş orta kesim, kerevit (Not: kan hazırlanması tamamlanmış zaman kurur, bu yüzden araçları yıkamak yapışkan olacaktır) ve sonra kafasını uçurma. Şekil 1: kerevitler Decapitation Chelipeds ve yürüme bacaklarını kesti. Sadece orta tailfin (uropod) bırakarak, sol ve sağ tailfins kesti. Kerevit dorsal tarafta dorsal manikür sağ ve sol tarafında ventral kesti. Şekil 2: Dorsal Tırnak Kaldırma , Kesim Sonra, dorsal karın manikür alt kısmında kaldırmak GI zarar görmesini önlemek için sığ olduğundan emin, manikür dorsal tarafında enine kesin. Disseke kerevit Sylgard astarlı çanak içine yerleştirin. Tailfin ucu çanak kerevit Pin. Bir vücudu basılı için gerekli olarak GI iki tarafında daha fazla pimleri kullanabilirsiniz. GI GI sürekli bir pipet kullanarak tuzlu su ile söndürmeye emin olun kapsayan kerevit salin ile çanak doldurun. 5.3 mM KCl; 13.5 mM CaCl 2 2H 2 O; 2.45 mM MgCl 2 6H 2 O; Tuzlu 205 mM NaCl ile yapılan modifiye Van Harreveld çözümü (1936), 5 mM Hepes ve pH 7.4 'e ayarlanır. Disseke kerevit Şekil 3'te gösterildiği gibi görünmelidir. Şekil 3: bozulmamış GI Dissected kerevit. 2.3) Deneyler Hayvan 2.3.1) Kasılmaları Banyo serum fizyolojik olarak hazır ve aynı sıcaklıkta test edilecek bileşik çözümler var. Üzerinde bireysel çözümler serotonin (100 nM 1microM), glutamat (1microM), ve test edilmesi için başlangıç maddeleri yapılan kerevit salin dopamin (1microM) kullanabilirsiniz. Diseksiyonu ve tuzlu maruz şok uyum sağlamak için, yaklaşık on dakika kerevit çözüm oturup disseke kerevit izin verin. Hindgut yavaş peristaltizm kasılmalar meydana başlamalıdır. Kasılmalar başlar sonra, otuz saniye (not: yani peristaltizm yazın veya spastik ve herhangi bir peristaltik dalgaların yönünü meydana kasılmaları türü) ortaya kasılmaları kaydeder. Tablo 1: Kerevit Tuzlu Kasılmaları Kasılmaların sayısı Kasılmaların Türü Bir pipette, kerevit maruz karın boşluğu içinde tuzlu su çıkarmak, ve hindgut üzerine doğrudan incelenmek üzere madde içeren serum fizyolojik uygulamak. Çözüm ekleyerek hemen sonra, otuz saniye sonra ortaya çıkan kasılmaların sayısı kayıt ve türü (yani peristaltik, ya da spastik) meydana kasılmaları not edin. Tablo 2: bileşiklere maruz Kasılmaları Bileşik test Konsantrasyon Kasılmaların sayısı Kasılmaların Türü Kayıt test maddesi yanıt hemen sonra, normal kerevit salin ile GI birkaç kez yıkayın. Her 30 saniye kerevit tuzlu su ile durulama sırasında hazırlanması, stand 5 dakika izin verin. Bir pipet kullanarak, incelenmiş ya da zengin bir son madde konsantrasyonu hindgut üzerine doğrudan test sonraki bileşik içeren bazı tuzlu su koyun. Bu düşük bir konsantrasyon ve yüksek konsantrasyonlarda iş yolu ile başlamak en iyisidir. Hemen her yeni bir madde ya da her yeni konsantrasyon ekledikten sonra, otuz saniye sonra ortaya çıkan kasılmaların sayısı kaydedebilir ve kasılmaların türüne dikkat edin. 2.3.2) eksize hazırlıkları daralma Kayıt kuvvetleri Şekil 4: Kurulum Transdüser köprü bölmesine takın. PowerLab 26T köprü bölmesine takın. PowerLab 26T bilgisayar üzerindeki USB portuna takın. LabChart7, masaüstü labchart7 simgesini tıklayarak açın. LabChart Welcome Center kutusu açılır. Kapatın. Kur'a tıklayın Kanal ayarları tıklayın. Tamam'a basın 1 (kutunun sol alt) kanal numarasını değiştirin. Grafiğin sol üst 2k hakkında saniyede döngüleri ayarlayın. MV yaklaşık 500 veya 200 volt (y-ekseni) ayarlayın. Kanal 1 grafiğin sağ tıklayın. Giriş Amplifikatör tıklayın. Emin olun ayarları: ac birleştiğinde, tek uçlu ve invert (gerekirse sinyali ters çevirir) ve anti-alias, kontrol edilir. Kaydetmeye başlamak başlamak için. Pick up hazırlanması ve GI toraks ve karın arasındaki kavşakta yolu kesmek. Sonra dikkatlice telzon kuyruk kısmı çevresinde kesti. Disseke kerevit GI yolu kaldırın ve Sylgard çanağın içine yerleştirin. GI yolu dorsal boyunca uzanan bir kan damarı vardır. GI trakt dikkatlice uzakta bu çekin. Hazırlanması üzerine taze kerevit tuzlu su dökün. Disseke kerevit yakın kelepçe kuvvet dönüştürücü yerleştirin. Şekil 5 de gösterildiği gibi, kerevit GI kuvvet dönüştürücü asın. Şekil 5: kuvvet dönüştürücü kanca takılı tuzlu kerevit İzole hindgut LabChart7 başlayacak GI sözleşme başlayıncaya kadar bekleyin ve bas. Yaklaşık 20 saniye boyunca yürütülen program olsun. Push "sadece Salin", "dur" ve etiketli bir yorum ekle. Tablo 4 doldurun. Tablo 4: bileşik faiz ile Kasılmaları Kasılmaların sayısı Kasılmaları Genlik (mV) Ilgi test bileşikleri ekleyin ve hemen LabChart7 "start" itin. Yaklaşık 20 saniye boyunca yürütülen program olsun. "Dur" itin ve grafik dosya eklendi ne madde ve konsantrasyonu olarak doğrudan bir yorum ekleyin. Aşağıdaki tabloyu doldurun. Tablo 5: _________ bileşik Kasılmaları Kasılmaların sayısı Kasılmaları Genlik (mV) Hazırlık bir pipet kullanarak kerevit tuzlu su ile durulayın. Benzer şekilde diğer maddeler veya çeşitli konsantrasyonlarda ekleyin. Hemen LabChart7 "start" itin. Yaklaşık 20 saniye boyunca yürütülen program olsun. Push "stop" ve c gösteren grafik dosya üzerinde doğrudan bir yorum ve etiket eklemekve konsantrasyon ompound. 3. Veri Analizi Deney, grafik her solüsyonu (serum fizyolojik, serotonin, glutamat) vs zaman kasılmaları 2.3.1. Herhangi bir eğilimleri açıklayın. Deney, her çözüm kasılmaları sayısı grafiği (tuzlu, serotonin, glutamat) vs mV kasılmaları genliği 2.3.2. Herhangi bir eğilimleri açıklayın. 3.1) Ölçme kasılmaların hızı ve kuvvet Endeksine başından itibaren bir sapma oranları üzerinde kasılmaları sonraki başında zamanı ölçmek veya bir ya da iki dakika içinde toplam deplasmanlar saymak. Değerleri yaşanıyor nasıl hızlı bağlı olarak, dakika ve saniye başına kasılmaları açısından konabilir. Kasılmaların gücü endeksine göreceli bir ölçü farklı koşullar karşılaştırmak için kullanılan olabilir. Kaydedilen dosya üzerinde bir marker "M" ve başlangıçtaki hareket. Sonra imleci kullanmak ve hareket sapma zirve ve ekranın sağ üst köşesinde bir delta değeri (M tepe farkı) olarak listelenen değeri not alın. Imleç değişim ölçmek için sabit tutulması gerekir. Ardından bir sonraki faiz dalga formu için M taşımak ve ölçü tekrarlayın.