هذا الفيديو يوضح نهجا بيئة تسيطر عليها لدراسة تحلل الأنسجة النباتية lignocellulosic بواسطة الفطريات الهوائية. القدرة على السيطرة على مصادر المواد الغذائية والرطوبة هي الميزة الرئيسية للأجار كتلة عوالم مصغرة ، ولكن كثيرا ما تؤدي نهج متفاوتة من النجاح. نعالج المزالق الحرجة لمحصول استنساخه ، وانخفاض تقلب النتائج.
Abstract
تم تطوير طرق الاساسيان لدراسة التحلل الحيوي للأنسجة النباتات الفطرية lignocellulosic لاختبار المواد الحافظة الخشب (كتلة التربة ؛ أجار كتلة). هل هو جيد أن تقبل التربة ومنع ارتفاع معدلات العائد عوالم مصغرة الاضمحلال ، وقضايا أقل رطوبة ، وخفض التباين بين الدراسات ، وارتفاع عتبات سمية المواد الحافظة. اختبار التربة لبنة وهكذا استخدمت تقنية أكثر وكانت موحدة من قبل الجمعية الأمريكية للاختبارات والمواد (ASTM) (D الأسلوب 1413-1407). تصميم كتلة التربة والسلبيات ، ولكن ، وذلك باستخدام مصادر التربة محليا ومتغير. في الحد من السيطرة على العناصر الغذائية الخارجية (خارجية) إلى الأنسجة المتحللة وقد ظهرت هذه العيوب بوصفها مشكلة في تطبيق هذا الأسلوب لأخرى ، وتهدف الأبحاث شعبية متزايدة. وتشمل هذه الأهداف الحديثة lignocellulosics المهينة للبحوث الطاقة الحيوية ، واختبار المعالجة البيولوجية للمشاركين في استقلاب المواد السامة ، وتقييم آليات الأكسدة ، وتتبع العناصر translocated على طول شبكات خوطي. كتل التربة لا تقرض تحكم بما فيه الكفاية في هذه التطبيقات. A المكرر أجار كتلة النهج هو ضروري.
هنا ، فإننا نستخدم بالعفن البني من الخشب والمهينة الفطر Serpula lacrymans للحط من الخشب في أجار كتلة عوالم مصغرة ، وذلك باستخدام أطباق بتري العميق مع منخفضة الكالسيوم آغار. نحن اختبار دور الجبس الخارجية على الاضمحلال في سلسلة من الوقت ، لإثبات فائدة والتباين المتوقع. كتل هي مشروطة من مجلس واحد مزق (قطع طولية) ، وزنه ، تعقيمها ، وقدم جو معقم و مطهر فوق شبكة من البلاستيك. التطعيمات هي فطرية في كل مواجهة الكتلة ، مع إضافة الجبس الخارجية في الواجهات. الحصاد وحتى الحصاد العقيم المدمرة النهائي. وقد صممت هذه عوالم مصغرة لتجنب الاتصال مع كتلة أجار أو جدران صحن بتري. يتم التقليل من خلال التكثيف وخلال لوحة يصب الحضانة. أخيرا ، يتم تصغير قيحة / الجبس / الخشب تباعد ولكن من دون السماح للإتصال به. هذه الجوانب التقنية أقل من أجار كتلة التصميم هي أيضا الأسباب الأكثر شيوعا من الفشل ومصدرا رئيسيا للتقلب بين الدراسات. نشر الفيديو وبالتالي من المفيد في هذه الحالة ، وعلينا أن نظهر التباين المنخفضة والعالية الجودة النتائج.
Protocol
ينطبق هذا البروتوكول على ركائز الخشبية وغير الخشبية ، على النحو المبين ، فضلا عن الفرن أو الهواء المجففة المواد. قراءة من خلال البروتوكول الأول ، ولكن ، قبل انشاء. هناك عدة نقاط أثارها التي قد تنطبق على دراستك ، وهذه نقطة (مسطرة) تتطلب التخطيط. أيضا ، علما أن هناك نشرا ?…
Discussion
باستخدام لدينا أجار انشاء كتلة (الشكل 1) نمت Serpula lacrymans في اتصال مباشر مع الجبس والسطوح إلى كتل الخشب (الشكل 2) ، مما أدى إلى أكثر من 60 ٪ خسارة الوزن في البني فسدت تحكم كتل الصنوبر (الشكل 3 ). هذا يرضي بسهولة هدف القياسية ASTM تسوس> 50 ٪ ، ومتوسط معامل الاختلاف (C V)</sub…
Schilling, J. S., Jacobson, K. B. Agar-Block Microcosms for Controlled Plant Tissue Decomposition by Aerobic Fungi. J. Vis. Exp. (48), e2283, doi:10.3791/2283 (2011).