نحن تصف تقنية microinjecting للأمينوغليكوزيد ، جنتاميسين ، في 2 يوما بعد fetilization (DPF) يرقات الزرد للحث على اصابة الكلى الحاد (AKI). نحن تصف أيضا طريقة لتحميل كامل المناعية ، والبلاستيك ، وتضمين sectioning اليرقات الزرد لتصور الضرر بوساطة AKI.
في هذه المقالة الفيديو وصفنا نموذج من الزرد آكي استخدام الجنتاميسين كما nephrotoxicant. تقنية تتكون من microinjections عن طريق الوريد على الزرد DPF 2. هذه التقنية تمثل وسيلة فعالة وسريعة لتوصيل مواد قابلة للذوبان في مجرى الدم من اليرقات الزرد ، والسماح للحقن الأسماك 15-20 ساعة. بالإضافة إلى دراسات AKI ، يمكن أيضا أن تكون هذه التقنية microinjection استخدامها لأنواع أخرى من الدراسات التجريبية مثل القسطرة. ونحن نقدم بروتوكول مفصل للتقنية من المعدات اللازمة لتدابير البصرية وظائف الكلى ينخفض. بالإضافة إلى ذلك ، علينا أن نظهر أيضا عملية ، تثبيت المناعية جبل بأكمله مع الكلى علامة أنبوبية ، وتضمين البلاستيك sectioning من الزرد اليرقات. علينا أن نظهر أن اليرقات الزرد حقنوا الجنتاميسين تظهر ملامح شكلية تتفق مع آكي : وذمة ، وفقدان الاستقطاب الخلية في الخلايا الظهارية الأنبوبية الداني ، والتعطيل المورفولوجية للنبيب.
في هذه المقالة الفيديو أثبتنا تقنية microinjection الوريد للنموذج آكي ، من خلال خلق جنتاميسين بوساطة الضرر أنبوبي الداني في يرقات الزرد. نتائج هذا الضرر في تشكيل و / أو وذمة تأموري الإجمالي ، مما يعكس عدم القدرة على تنظيم التوازن المائي. كما وصف لنا تجربة مع الأجسام المضادة المناعية التي نبيبات الكلى علامات متباينة (ماجومدار وآخرون 2000) ، والتي تبين فقدان الخلية القطبية واختلال نبيب الداني في الكلى التالفة. microinjections الوريد تمثل وسيلة فعالة لتقديم مادة قابلة للذوبان في مجرى الدم من اليرقات الزرد. هذا الأسلوب هو أداة ممتازة لإدخال مجموعة متنوعة من المواد وبمساعدة من الحقن علامة موحدة الفلورسنت يمكن أن يتكرر عدة مرات السماح لنتائج متسقة.
The authors have nothing to disclose.
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية الاميركية للمنح (NIH) والصحة R01DK069403 P30DK079307.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
α6F mouse monoclonal | Developmental study Hbridoma Bank | |||
Block Holder EBH-2 | Polysciences, Inc. | 15899 | ||
Borosilicate Glass Capillaries | World Precision Instruments, INC | TW100-6 | ||
Capillary tubes R-6 Custom Glass Tubing | Drummond Scientific Company, Broomall PA | 9-000-3000 | ||
Catalyst Powder | Polysciences, Inc. | 02618 | ||
Cy3 | Jackson Immunoresearch Laboratories, Inc. | 155-165-003 | ||
Dextran 10k Lucifer yellow, lysine fixable | Molecular probes | D1825 | ||
DMSO | Sigma | D8418 | ||
Eyelash | Ted Pella | 113 | ||
Gentamicin sulfate | Sigma-Aldrich | G8648 | ||
Glass vials 4ml | Weathon | 225012 | ||
Iron plate | Nariscige | IP | ||
JB-4 Embedding Solution A | Polysciences Inc. | 0226A | ||
JB-4 Embedding Solution B | Polysciences, Inc. | 0226B | ||
Joystick micromanipulator | Narishige | MN 151 | ||
Magnetic stand | Narishige | MN-151 | ||
Manual microsyringe pump | World Precision Instruments, Inc | |||
Microinjection apparatus | World Precision Instruments, Inc. | PV820 | ||
Micromanipulator | World Precision Instruments, Inc. | M3301R | ||
Microtome | Thermo Electro Corporation | Shandon Finesse | ||
Mineral oil, light | Fisher Chemicals | 0121-1 | ||
Pipette puller | Kopf | 720 | ||
Plastic molding cup tray | Polysciences, Inc. | 16643A | ||
Razor blade | WVR Scientific | 55411-050 | ||
Slide warmer | Lab line | |||
Stage micrometer | Wards | 94 W 9910 | ||
Tilting base | World Precision Instruments, Inc. | TB 1 | ||
Tricaine powder | Sigma | A-5040 | ||
Tween 20 | Sigma | P7949 | ||
Microscope | Leica | S6F | Dissecting microscope | |
Microscope | Leica | M205FA | Fluorescent microscope |