الفحص التجريبي الإنبثاث
Summary
توضح هذه المقالة الإجراءات لفحص الانبثاث التجريبية التي تستخدم لتحديد إمكانية النقيلي من خطوط الخلايا السرطانية البشرية.
Abstract
الانبثاث هي السبب الرئيسي للوفاة لدى مرضى السرطان. لفهم آلية من ورم خبيث ، أنشئت لفحص الانبثاث تجريبية باستخدام الفئران العوز المناعي. هذه المادة يحدد الإجراءات التي ينطوي عليها هذا الاختبار ، بما في ذلك إعداد العينات ، والحقن في الوريد ، واستنبات الخلايا من الانبثاث الرئة. لفترة وجيزة ، تم إعداد عدد محدد مسبقا من الخلايا السرطانية البشرية<em> في المختبر</em> وحقنه مباشرة في الدورة الدموية للفئران العوز المناعي عن طريق الأوردة ذيلها. وهناك عدد قليل من الخلايا تنجو من اضطرابات في الدورة الدموية وتنمو الانبثاث في الأعضاء الداخلية ، مثل الرئة. يتم تشريح الفئران حقن بعد فترة معينة. يتحدد توزيع الأنسجة الانبثاث تشريح تحت المجهر. يتم احتساب عدد الانبثاث في نسيج معين وأنه يرتبط بشكل مباشر مع القدرة النقيلي من حقن الخلايا السرطانية. يتم عزل الانبثاث نشأت ومثقف<em> في المختبر</em> كخطوط الخلية ، والتي غالبا ما تظهر قدرات محسنة النقيلي من خط الوالدين عندما تم حقنها في الفئران مرة أخرى العوز المناعي. هذه المشتقات المنتشر بشدة تصبح أدوات مفيدة لتحديد الجينات الجزيئية أو المسارات التي تنظم التقدم النقيلي.
Protocol
Discussion
الانبثاث هي السبب الرئيسي للوفاة لدى مرضى السرطان. أنها تنطوي على أربع خطوات رئيسية : المفرزة من الخلايا السرطانية من مواضع الأساسي ، دخولهم في التداول (intravasation) ، خروجهم من التداول (التسرب) ، والبقاء والنمو في الجهاز البعيد. يعتبر ورم خبيث في الإنسان عملية بطيئة وتجلت…
Acknowledgements
وقد تم اختبار هذا البروتوكول وتحسينه في البداية في مختبر الدكتور ريتشارد هينز (MIT). يتم توفير التمويل من جانب NYSTEM جائزة IDEA (لLX) وروث L. كيرشتاين خدمة القومي للبحوث جائزة (لLX).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | ||
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | ||
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | ||
| KCl | Mallinckrodt Chemicals | 6838-04 | ||
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Chemicals | 7896-04 | ||
| KH2PO4 | Mallinckrodt Chemicals | 7100-12 | ||
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | ||
| EDTA-Na | EMD Biosciences | 4010 | ||
| Trypan Blue | Invitrogen | 15250-061 | ||
| Trypsin 2.5% | Invitrogen | 15090-046 | ||
| Ethanol | Ultrapure | 200-CSGP | ||
| 50 ml Falcon Tube | VWR | 89039-656 | ||
| Microcentrifuge Tubes | Axygen Scientific | MCT-175-C | ||
| Falcon 70µm Cell Strainer | BD Biosciences | 352350 | ||
| 5ml Falcon Culture Tube | VWR | 60818-576 | ||
| Hemacytometer | Hausser Scientific | 15170-208 | ||
| 1 ml syringe | BD Biosciences | 329650 | ||
| 30 ½ gauge needle | BD Biosciences | 305106 | ||
| Mouse restrainer | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | ||
| Surgical scissors | Fisher Scientific | 08-940 | ||
| Forceps | Fisher Scientific | 08-902 | ||
| Dissecting Microscope | Nikon | SMZ1500 | ||
| Benchtop Centrifuge | Thermoscientific | 75003491 |
References
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC. Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).
- Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).
- Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice. J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).
- Kang, Y. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).
