此过程介绍了一个快速简便的工作流程,引入困难的siRNA转染细胞系,并按照实时PCR基因表达。使用自动细胞计数器,多井的电板,全自动电泳站提供快速和可靠的结果,而不需要昂贵的机械手。
使用的siRNA介导的基因敲除继续在基因表达研究中的一个重要工具。 siRNA的研究,不仅要研究单个基因的下调的影响,但也询问信号通路和其他复杂的相互作用网络。这些途径分析需要使用有关的细胞模型和方法,导致少扰动细胞生理学。电穿孔是越来越多地被用来作为一种有效的方式引入难以siRNA和其他核酸,细胞株和原代细胞的转染而不改变正在调查中的信号转导通路。有一个成功的siRNA实验的多个关键步骤,并且有办法在几个实验阶段,同时提高数据的质量,简化工作。为了帮助您与您的siRNA介导的基因敲除项目开始,我们将演示如何执行一个途径的研究,从收集和计数细胞前通过后转实时PCR基因表达分析,以电的完整。下面的研究探讨IL – 4在Burkitt淋巴瘤细胞系(Namalwa)CCL17依赖基因表达的转录激活因子STAT6的作用。本文演示的技术是很有用的一个广泛的siRNA实验的基础上壁和悬浮细胞。我们还将展示如何精简细胞与TC10自动细胞计数计数,如何electroporate MXcell电系统同时使用多个样品,以及如何同时评估RNA的质量和数量的Experion自动电泳系统。
本文演示了如何electroporate陷入困境的siRNA转染悬浮细胞系,如何遵循这些细胞的基因表达。执行此过程时,重要的是要记得保持尽可能一致的,所有样品的事情。
The authors have nothing to disclose.