Le electroolfactogram (EOG) l'enregistrement est une instructive, facile à réaliser et fiable d'évaluer la fonction olfactive au niveau de l'épithélium olfactif. Ce protocole décrit une configuration d'enregistrement, de préparation des tissus de la souris, la collecte de données et d'analyse des données de base.
Animaux dépendent pour beaucoup sur l'olfaction comportements critiques, telles que trouver des sources de nourriture, éviter les prédateurs, et l'identification des congénères pour l'accouplement et autres interactions sociales. Le electroolfactogram (EOG) est une méthode d'enregistrement informatif, facile à conduire, fiable et à la fonction olfactive de dosage au niveau de l'épithélium olfactif. Depuis la description de 1956 de l'EOG par Ottoson de grenouilles 1, l'enregistrement EOG a été appliquée dans de nombreux vertébrés, y compris les salamandres, les lapins, les rats, les souris et les humains (revu par Scott et Scott-Johnson, 2002, réf. 2). Les récents progrès dans la modification génétique sur les souris ont ravivé l'intérêt pour l'enregistrement de la EOG pour la caractérisation physiologique de la fonction olfactive de knock-out et souris knock-in. Enregistrements EOG ont été appliquées avec succès à démontrer le rôle central des composants olfactifs transduction du signal 3-8, et plus récemment pour caractériser la contribution de certains mécanismes de réglementation pour les réponses OSN 9-12.
Détection Odorant produit à la surface de l'épithélium olfactif sur les cils des ARS, où une cascade de transduction du signal conduit à l'ouverture de canaux ioniques, générant un courant qui circule dans les cils et dépolarise la membrane 13. L'EOG est le potentiel négatif enregistré extracellulaire à la surface de l'épithélium olfactif lors de la stimulation odorante, résultant d'une sommation des changements potentiels causés par les différents réactifs ARS dans le domaine de l'enregistrement 2. Comparaison de l'amplitude et la cinétique de l'EOG donc fournir de précieuses informations sur la façon dont la modification génétique et d'autres manipulations expérimentales influencent la signalisation moléculaire sous-jacente de la réponse aux odeurs OSN.
Nous décrivons ici un enregistrement EOG air de phase sur une préparation de cornets de souris olfactif. Brièvement, après avoir sacrifié la souris, les cornets olfactifs sont exposés par la bissectrice de la tête le long de la ligne médiane et en enlevant la cloison. La préparation du cornet est ensuite placé dans la configuration de l'enregistrement, et une électrode d'enregistrement est placé à la surface de l'épithélium olfactif sur l'un des cornets médial. Une électrode de référence est relié électriquement à travers le tissu d'une solution tampon. Un flux continu de l'air humidifié est soufflé sur la surface de l'épithélium pour le garder humide. La vapeur de solutions odorisant est soufflé dans le flux d'air humidifié pour stimuler l'épithélium. Les réponses sont enregistrées et numérisées pour une analyse ultérieure.
Avec la configuration décrite dans ce protocole, les stimuli olfactifs à la surface de l'épithélium olfactif sera compatible entre les préparations des tissus, permettant une comparaison entre le type sauvage et des souris mutantes, même si la concentration odorante exacte et la dynamique sont inconnus. Plusieurs facteurs, notamment l'emplacement d'enregistrement et le débit d'air humidifié, provoquent des variations de l'EOG. Il faut prendre soin d'enregistrer à partir des positions similaires sur le même cornet pour minimiser les variations. Cela peut facilement être réalisée par le l'enregistrement à partir du même côté de la tête et en gardant l'empreinte du microscope, le tube de livraison odeur, et micromanipulateurs sur la table de l'air stable entre des échantillons de tissus. En outre, des échantillons de tissus devraient être immédiatement placés dans le flux d'air humidifié après la dissection afin d'éviter un séchage excessif des tissus.
Enregistrements EOG sur les souris peuvent également être réalisées avec un appareil de perfusion du liquide sur la souris préparées cornets 7, 14, 15, ou en laissant la tête intacte et l'insertion de l'électrode dans un petit trou percé au-dessus des 16 cornets, 17. Chaque variation de l'enregistrement EOG a ses propres forces: air-phase des enregistrements sur des préparations de tissus tels que décrits dans ce protocole nécessite une quantité minime de configuration et sont plus faciles à mener, des enregistrements en utilisant un appareil de perfusion de liquide de faciliter l'utilisation de réactifs pharmacologiques, bien que le nature hydrophobe des molécules odorantes de nombreux complique la livraison d'odeur, enfin, les enregistrements dans lesquels la tête est laissée intacte peut être utilisé en «artificiel renifler» les expériences, même si le placement des électrodes est plus difficile que lorsque les cornets sont totalement exposés.
The authors have nothing to disclose.
Nous remercions le Dr Yijun Song, et les membres du Hattar Kuruvilla Zhao tri-laboratoire du Département de biologie, Université Johns Hopkins pour les conseils et l'aide. Soutenu par des subventions du NIH et de DC007395 DC009946.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Air delivery tube | equipment | Custom fabricated | The barrel of a 1-mL syringe with a T-fitting can be used as a substitute | |
Air table | equipment | Newport | LW3030B-OPT | |
Amplifier | equipment | Warner | DP-301 | |
Computer and Data Acquisition Software | equipment | Axograph 4.9.2 on Apple Macintosh | Updated versions of Axograph for Mac OS X and Windows are available from http://axographx.com/. | |
Butane torch | equipment | A crème brûlèe torch works well | ||
Digitizer | equipment | Axon Instruments | Digidata 1322A | |
Dissecting Scope | equipment | Scienscope | SSZ | |
Electrode holder | equipment | Harvard Apparatus | 64-1021 | |
Magnetic Holding Devices (12 mm) | equipment | World Precision Instruments | M10 | |
Micromanipulators | equipment | World Precision Instruments | M3301R M3301L |
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Micropipette Puller | equipment | Sutter Instrument Co. | P2000 | |
Oscilloscope | equipment | Tektronix | 5110 | |
Picospritzer III | equipment | Parker Instrumentation | ||
Silicone tubing | equipment | Nalge Nunc | ||
Specimen stage | equipment | Custom fabricated | Any small solid object can be used to elevate the mounting dish. Immobilize the dish with modeling clay. | |
18 gage needles | material | Becton Dickinson | 305195 | |
2 oz. glass bottles | material | VWR International | 16152-201 | |
Glass capillaries | material | World Precision Instruments | TW150F-6 | |
Silicone stoppers size 16D | material | Chemware | D1069809 | |
Silver wire | material | World Precision Instruments | AGW1010 | |
SylGuard 184 | material | Dow Corning | SYLG184 | From World Precision Instruments |
Agarose | reagent | Invitrogen | 15510-027 | |
Amyl acetate | reagent | Aldrich | W504009 | |
Calcium chloride (CaCl2) | reagent | Sigma | C-1016 | |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | reagent | Sigma | D5879 | |
HEPES | reagent | Fisher | BP310 | |
Heptaldehyde | reagent | Aldrich | H2120 | |
Magnesium chloride hexahydrate (MgCl2+6H2O) | reagent | Sigma | M9272 | |
Sodium chloride (NaCl) | reagent | JT Baker | 3624-05 | |
flowmeter | equipment | Gilmont | GF-2260 |