Drosophila hemocytes gelişmekte olan embriyonun bütünlüğü içinde dağılırlar . Bu protokol, floresan etiketli hemocytes embriyoları kullanılarak bu göçler montaj ve görüntü nasıl gösteriyor.
Birçok çalışma, adres hücre göçü<em> In vitro</em> Yöntemleri, fizyolojik ilgili çevre ise organizmanın kendini. Burada montaj için bir protokol<em> Drosophila melanogaster</em> Embriyo ve floresan etiketli hemocytes sonraki canlı görüntüleme, bu organizmanın embriyonik makrofajlar. Gal4 UAS sistemini kullanarak<sup> 1</sup> Embriyo boyunca gelişimsel dağılma takip hemocytes genetik olarak kodlanmış, floresan etiketli işaretleyicileri çeşitli ifadesi sürücü. Embriyo gelişiminin istenilen aşamada aşağıdaki toplama, dış koryon kaldırılır ve embriyoların daha sonra bir hidrofobik, gaz geçirgen bir zar ve canlı görüntüleme için bir cam lamel arasında Halokarbon yağ monte edilmiştir. Hız ve yönlülük, F-aktin ve mikrotübüller bu sitoskeletal bileşenlerin dinamikleri ile ilgili daha detaylı bilgi verebilir floresan gazetecilere kullanımı ile birleştiğinde yüksek çözünürlüklü görüntüleme gibi brüt göçmen parametrelere ek olarak.
Bu prosedürün en önemli unsurlardan açıkça etiketli hemocytes sağlıklı embriyoların seçimi ve onlara zarar vermeden bunları dikkatli bir şekilde monte etmek için. Birkaç saat süreyle imaged embriyoların Halokarbon yağı sonra dehidratasyon dayanıklı ve bir kez monte edilebilir. Bizim ellerde 40X amacı ile her üç dakikada bir Zeiss LSM510 konfokal mikroskop görüntüleri z yığını alarak, embriyo ya da açık foto-hasar ihmal dehidratasyon üç saat görüntü hemocytes,. Hemocytes son derece d…
Bu protokol, Paul Martin ve Antonio Jacinto laboratuvarları ile işbirliği içinde ve çalışma ile geliştirilmiştir. Biz Bloomington Menkul Kıymetler Merkezi sinek satırları paylaşmak için devam etmek için mükemmel servis ve Drosophila topluluk için teşekkür ederiz . BS BBSRC bir proje hibe ile finanse edilmektedir. WW, Wellcome Trust Kariyer Geliştirme Bursu tarafından finanse edilmektedir.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |