自从詹姆斯汤姆森等人在1998年开发出一种技术,隔离,并在文化中成长的胚胎,已成为供以后使用,从冻结的股票解冻和扩大细胞的冷冻细胞进行常规胚胎干细胞培养中的重要程序。由于胚胎干细胞的冷冻和解冻的压力非常敏感,必须特别小心。在这里,我们表现出适当的技术迅速解冻胚胎干细胞从液氮股,对小鼠胚胎馈线细胞电镀,慢慢冻结他们长期储存。
自詹姆斯汤姆森<em>等</em>在1998年开发出一种技术,隔离,并在文化中成长的胚胎,冷冻细胞以供日后使用,从冻结的股票解冻和扩大细胞已成为进行常规胚胎干细胞培养中的重要程序。由于胚胎干细胞冷冻和解冻的压力非常敏感,必须特别小心。在这里,我们表现出适当的技术迅速解冻胚胎干细胞从液氮股,电镀小鼠胚胎馈线细胞,并慢慢地冻结他们长期储存。
附带的视频演示解冻和冷冻胚胎干细胞的方法。应在液态氮中冷冻细胞解冻后尽快洗澡,以获得最佳的复苏。记住,要非常小心,移液解冻细胞时,:尽量减少处理的细胞和吸管轻轻。一小瓶胚胎干细胞可以被镀到任何一个6孔板,或4孔板井,并立即放置在孵化器。由于在四个独立的井培养减少失去整个文化污染的可能性,并可以更容易地找到胚胎干细胞克隆较小的表面积,4孔板时,建议第一次解冻胚胎干细胞。
解冻后的胚胎干细胞的第一天,菌落很小,可能是透明的。每天补充的胚胎干细胞培养液,殖民地,即使在显微镜下明显,因为它可能需要几天在文化为胚胎干细胞出现为建立殖民地。重要的是使用新鲜镀的MEF饲养层细胞解冻时,殖民地常常不能达到一个合适的大小,传代后,直到10月12日解冻。
解冻时的胚胎干细胞的低传小瓶,这是很好的做法,扩大和冻结额外的小瓶,保持低传代细胞,为未来的文化和实验的股票。定期冻结所有“额外”的健康胚胎干细胞保持冻结的股票,这也是一个好主意。作为高品质的,无差别的,积极除以胚胎干细胞克隆的最成功的解冻和随后的文化被冻结。胚胎干细胞恢复冻结,更有效地处理较大的细胞聚集轻轻。最后的总大小应该是相似的(或稍大)后例行通过镀聚合的大小。