A cavidade peritoneal em mamíferos contém diferentes populações de células imunes crucial para a resposta imune inata. Um método eficiente de isolamento é necessário para análises bioquímicas e funcionais dessas células. Aqui nós fornecemos um método abrangente para o isolamento de células na cavidade peritoneal do rato.
A cavidade peritoneal é uma cavidade ligada à membrana e cheias de líquido abdominal dos mamíferos, que contém o fígado, baço, a maior parte do trato gastro-intestinal e outras vísceras. Abriga uma série de células do sistema imunológico, incluindo macrófagos, células B e células T. A presença de um elevado número de macrófagos naïve na cavidade peritoneal torna um local preferido para a coleção de macrófagos teciduais naïve residente (1). A cavidade peritoneal também é importante para o estudo das células B por causa da presença de um único subconjunto de células da cavidade peritoneal residente B conhecidas como células B1, além de células B2 convencionais. Células B1 são subdivididas em B1a e B1b células, que podem ser distinguidas pela expressão de superfície de CD11b e CD5. Células B1 são uma importante fonte de IgM natural, proporcionando proteção precoce de uma variedade de patógenos (2-4). Estas células são auto-reativos na natureza (5), mas como eles são controlados para evitar a auto-imunidade ainda não é totalmente entendido. Pelo contrário, CD5<sup> +</supCélulas> B1a possuem algumas propriedades reguladoras em virtude de sua capacidade de produção de IL-10 (6). Portanto, as células B1 peritoneal da cavidade são uma população de células interessante estudar por causa de sua função diversa e muitas perguntas sem resposta associada com o seu desenvolvimento e regulação. O isolamento da cavidade peritoneal residente células do sistema imunológico é complicado por causa da falta de uma estrutura definida no interior da cavidade peritoneal. Nosso protocolo vai descrever um procedimento viável para a obtenção de células do sistema imunológico a partir da cavidade peritoneal de camundongos, que então pode ser usado para a análise fenotípica por citometria de fluxo e para diferentes ensaios bioquímicos e imunológicos.
Isolamento de células da cavidade peritoneal é uma técnica importante para o estudo das diferentes células do sistema imunológico, principalmente macrófagos e subpopulações de células B específicas. Embora este seja um processo simples, existem alguns passos críticos envolvidos. Presença de contaminação de sangue na amostra coletada deve ser evitada para obter uma população de células pura peritoneal da cavidade. Eutanásia por deslocamento cervical deve ser feito com cuidado para evitar a contaminação de sangue na cavidade peritoneal. Alternativamente CO 2 pode ser usado. Além disso, durante o procedimento adequado de cuidados devem ser tomados para evitar a perfuração da bexiga ou quaisquer outros órgãos na cavidade peritoneal. Recuperar a maior parte do fluido injetado é também importante para o rendimento das células.
Este procedimento é amplamente utilizado para estudar a biologia dos macrófagos desde números moderados de residentes, macrófagos unstimulated pode ser facilmente obtida a partir da cavidade peritoneal, em contraste com a laboriosa tarefa de diferenciar as células progenitoras mielóides em macrófagos maduros in vitro, usando fator estimulador de colônias de macrófagos (8 , 9). O rendimento de macrófagos da cavidade peritoneal pode ser melhorada usando o método de elicitação de tioglicolato, embora o uso tioglicolato pode alterar as propriedades fisiológicas dos macrófagos (7).
Células B são uma parte importante do nosso sistema imunológico jogar um papel crucial em ambos os imunidade inata e adaptativa. Em subpopulações de células diferentes B, células B1 compõem um único subconjunto de células B envolvidos na imunidade inata, auto-imunidade e regulação imune. Células B1 estão localizados principalmente na cavidade peritoneal e estão reabastecendo self. Eles são uma das principais produtoras de IgM natural que fornece a primeira linha de defesa contra uma série de vírus e bactérias (10-12). Células B1 também são uma importante fonte de IL-10 (6), que é uma importante citocina envolvida na regulação imune. Embora vários estudos tenham sido prosseguida com as células B1, ainda há espaço para uma avaliação mais aprofundada das suas funções contrastantes, especialmente o seu papel regulador. Peritoneal cavidade método de isolamento de células proporciona a oportunidade única de estudar as funções das células B1.
Este trabalho foi financiado em parte pelo NIH conceder AI069358 ea Fundação de Pesquisas BloodCenter.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Thioglycollate Medium, Brewer Modified | BD BBL | 211716 |