الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الثاني : تنقية الثقافة والإنسان من الفشوت
Summary
تحقيق الجودة العالية وكمية مناسبة من الجزر الإنسان هي واحدة من أبرز الشروط لنجاح زرع جزيرة. في هذا الفيديو ، ونحن تصف خطوة بخطوة لإجراءات العزل جزيرة البنكرياس الإنسان (الجزء الثاني : تنقية الثقافة والجزر البشرية) باستخدام أسلوب تعديل الآلي.
Abstract
إدارة مرض السكري نوع 1 هو مرهقة ، سواء على الفرد والمجتمع ، وتكلف أكثر من 100 مليار دولار سنويا. على الرغم من الاستخدام الواسع النطاق للرصد الغلوكوز والانسولين صياغات جديدة ، وتطوير العديد من الأفراد لا تزال مضاعفات ثانوية مدمرة. ويمكن زرع البنكرياس جزيرة بالقرب من استعادة السيطرة على مستويات الجلوكوز الطبيعي في مرضى السكري<sup> 1</sup> ، دون التعرض لخطر نوبات سكر الدم الخطيرة التي ترتبط مع العلاج المكثف بالأنسولين. توفير ما يكفي من الكتلة جزيرة المهم للجزيرة زرع ناجحة. ومع ذلك ، وخصائص الجهات المانحة ، والمشتريات ، والحفاظ على الجهاز تؤثر على النتيجة عزلة<sup> 2</sup>. في جامعة إلينوي في شيكاغو (UIC) وضعنا بروتوكولا العزلة ناجحة مع التدرج تحسين تنقية<sup> 3</sup>. بدأ البرنامج في يناير 2004 وأجريت أكثر من 300 من العزلة حتى نوفمبر 2008. تم إرسال بنكرياسات في حلول الحفاظ الباردة (UW ، جامعة ويسكونسن أو HTK ، الحامض الأميني تريبتوفان كيتوغلوتارات)<sup> 4-7</sup> لخلية مختبر العزل في المحاكم الاسلامية لعزل الجزيرة. وقد تم عزل جزيرات البنكرياس باستخدام الأسلوب UIC ، الذي هو نسخة معدلة من الطريقة الموصوفة في الأصل من قبل Ricordi<em> وآخرون</em><sup> 8</sup>. كما هو موضح في الجزء الأول : كان الهضم ومجموعة من الأنسجة البنكرياس ، قلصت البنكرياس البشري ، مقنى ، perfused ، وهضمها. وبعد جمع ما لا يقل عن 30 دقيقة من الحضانة في حل UW ، تم تحميل الأنسجة في فاصل الخلية (كوبي 2991 ، كوب ، يكوود ، وأول أكسيد الكربون) لتنقية<sup> 3</sup>. تم تحديد تنقية التالية ، جزيرة الغلة (معبرا عنه مكافئات جزيرة ، IEQ) ، وحجم الأنسجة ، والنقاء وفقا للطرق القياسية<sup> 9</sup>. وكان المثقف الجزر المعزولة في CMRL – 1066 وسائل الإعلام (Mediatech ، هيرندون ، فرجينيا) ، على أن تستكمل مع الزلال البشري 1.5 ٪ ، 0.1 ٪ للأنسولين ترانسفيرين ، السيلينيوم (ITS) ، 1 مل من سيبروفلوكساسين ، 5 مل من HEPES 1M ، و 14.5 مل 7،5 ٪ بيكربونات الصوديوم في قوارير T175 في 37 درجة مئوية خلال الليل قبل أن الثقافة زرع الجزر أو استخدامها لأغراض البحث.
Protocol
Discussion
على الرغم من التقدم الكبير في تقنيات العزل جزيرة الإنسان ، جزيرة الغلة يبقى متغير بدرجة كبيرة وغير متوقعة. تنقية نسيج البنكرياس هضمها أمر حاسم لاستعادة جزيرة كتلة كافية بعد الهضم الأنزيمي ناجحة لزرع الأعضاء. ويوصى الأسلوب لأن تنقية UIC وقد تجلى انتعاش متفوقة من الجزر …
Acknowledgements
بدعم من المؤسسين من جامعة إلينوي في شيكاغو ، وكذلك جزيرة خلية منح مركز الموارد المعاهد الوطنية للصحة (RFA – RR 05-003) ، ومؤسسة كريستوفر ، ومؤسسة Efroymson ، ومؤسسة Tellabs.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Centrifuge | equipment | Beckman Coulter | 424803 | |
| Cobe 2991 Cell Processor | equipment | Gambro. BCT | 2556 | islet purification |
| MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1 | equipment | Leica Diagnostic Instrument Co | 4103 | |
| Cell Culture Dish with 2 mm Grid | equipment | Nunc Brand Products | 174926 | islet counting |
| Digital Sight DS L1 | equipment | Nikon | 217267 | |
| COBE bag | disposable equipment | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175 culture flask | disposable equipment | Sarstedt | 83.1812.500 | |
| University of Wisconcin (UW) solution | reagent | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s Buffered Salt Solution (HBSS) | reagent | Mediatech Inc | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reagent | Bichrom AG | L6155 | |
| M199 media (wash solution) | reagent | Mediatech Inc | 99-784-CM | |
| Final wash/Culture Medium | reagent | Mediatech Inc | 99-785-CV | |
| Dithizone | reagent | Sigma | D5130 |
References
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function. Diabetologia. 48, 906-912 (2005).
- Barbaro, B. Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient. Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).
- Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance. Transplantation. 59, 689-694 (1995).
- Fridell, J. A. Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation. Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).
- Potdar, S. Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation. Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).
- Salehi, P. Human islet isolation outcomes from pancreata preserved with Histidine-Tryptophan Ketoglutarate versus University of Wisconsin solution. Transplantation. 82, 983-985 (2006).
- Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. Automated islet isolation from human pancreas. Diabetes. 38 Suppl 1, 140-142 (1989).
- Ricordi, C. Islet isolation assessment in man and large animals. Acta Diabetol Lat. 27, 185-195 (1990).
