アンペロメトリー電極の作製
Summary
このプロトコルは、炭素繊維電極を生成する方法について説明します。電極は、その後、炭素繊維のアンペロメトリーと小胞からのカテコールアミン放出を検出するために使用されます。
Abstract
炭素繊維電極は、電流測定の測定のための単一細胞内小胞からのカテコールアミンの放出を検出するために重要です。ここで、我々は、低ノイズ（<0.5 Pa）の電極を生成するために必要なテクニックを説明します。技術は、以前の研究（1,2）によって発行された記述から変更されています。電極は、炭素繊維を作製し、繊維を吸引するフィルターで真空を使用して、各キャピラリーチューブに個別にスレッドによって行われます。次に、繊維と毛細管は微尖った先端で二つの部分、それぞれを作成し、電極プラーによってプルアップされています。電極はエポキシガラスのシールを作成するための硬化剤と混合して熱い、液状エポキシ樹脂に浸漬されています。最後に、電極はエポキシ樹脂を硬化するオーブン内に配置されます。電極を慎重に取り扱い、それらが一貫して損傷することなく行われることを保証することが重要です。このプロトコルは、単一細胞から記録するための電流測定電極を作製し、カットする方法を示しています。
Protocol
Discussion
このプロトコルは、電流滴電極を生成し、カットする方法について説明します。電流測定の録音中に、炭素繊維の電極は、分泌細胞の表面に配置されます。エキソサイトーシス活性は、カテコールアミンの酸化後の電子の移動によって生じる電気化学的電流を示す電流測定スパイクとして観測される。練習は作るとアンペロメトリック電極を切断すると、ノイズレベルを大幅に市販の電極の?…
Acknowledgements
我々は、このプロトコルが最初に設計され、その研究室で、シカゴ大学で博士アーロンP.フォックスに感謝、そしてプロトコルのさらなる発展のためのウィリアムローデン（セントルイス大学）。
私たちは、ホワイトホール財団と支援のための国立科学財団に感謝します。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes | Reagent | Sigma Aldrich | P23954-100G04 716AJ | Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light. |
| Carbon Fibers | Material | Goodfellow | C005725 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes | Material | Fisher | NC9836768 | |
| Epoxy Resin | Reagent | Miller-Stephenson | Epon Resin 828 | |
| Dissecting Microscope | Instrument | |||
| Electrode Puller | Instrument | Narishige Japan | PP-830 | 1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C |
| Oven | Instrument | set to 100 degrees F. | ||
| Hot plate | Instrument | set to 55 degrees C |
References
- Mundorf, M. L., Wightman, R. M. Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells. Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).
- Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. Good practices in single-cell amperometry. Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).
