Das chirurgische Verfahren zur Induktion einer einseitigen Hinterlauf Ischämie nachgewiesen wird, mit der Bestätigung der Ischämie durch Laser-Doppler-Perfusion.
In den Vereinigten Staaten betrifft periphere arterielle Verschlusskrankheit (pAVK) etwa 10 Millionen Menschen und ist auch weltweit verbreitet. Medizinische Therapien für symptomatische Linderung sind begrenzt. Chirurgische oder endovaskuläre Interventionen sind für einige Einzelpersonen nützlich, aber die langfristigen Ergebnisse sind oft enttäuschend. Als Ergebnis gibt es einen Bedarf für die Entwicklung neuer Therapien zur Behandlung von PAD. Die murine Hinterlauf Ischämie Vorbereitung ist ein Modell der PAD, und ist nützlich für die Erprobung neuer Therapien. Im Vergleich zu anderen Modellen der Gewebeischämie wie koronare oder zerebrale Arterienligation Vergleich bietet Femoralarterie Ligation für ein einfacheres Modell von ischämischem Gewebe. Weitere Vorteile dieses Modells sind die Leichtigkeit des Zugangs zu den Femoralarterie und niedrige Sterberate.
In diesem Video zeigen wir die Methodik für die murine Modell der einseitigen hindimb Ischämie. Die spezifischen Materialien und Verfahren für die Erstellung und Auswertung des Modells beschrieben werden, einschließlich der Beurteilung der Extremitäten-Perfusion mittels Laser-Doppler-Bildgebung. Dieses Protokoll kann auch für die Transplantation und nicht-invasive Tracking von Zellen, die von Huang et al demonstriert. 1 genutzt werden.
Es gibt einige Quellen der Variabilität zu berücksichtigen bei der Planung und Durchführung Hinterlauf Ischämie-Modellen. Erstens kann das Niveau der Ischämie nach dem Standort der Ligation in Bezug auf die von Seitenästen variieren. Daher ist für die Konsistenz des Modells sollten die Tiere erleiden das gleiche Maß an Arterienligatur. Eine weitere Quelle der Variabilität in ischämischen Erholung auf das Alter der Tiere ist im Zusammenhang mit jungen Tieren (6-8 Wochen alt) mit schneller und vollständiger Verwertungsquoten als ältere Tiere (8-10 Monate alt), geändert durch hämodynamische (dh beurteilt Laser-Doppler-Perfusion) oder funktionelle (dh Laufband Test) misst. Für Studien, in der man der Beurteilung eines Angiogenese-Medikament, kann es vorteilhaft sein, ältere Tiere zu verwenden, da ein größerer Unterschied zwischen den Gruppen mit einer therapeutischen Intervention beobachtet werden können. Umgekehrt gilt für Studien, in der man die Beurteilung einer anti-angiogenen Faktor ist, kann es vorteilhaft sein, jüngere Tiere zu verwenden, um Wirkung der Größe 3 zu maximieren.
Wenn richtig ausgeführt, sollte es minimal Komplikationen wie Blutungen, Infektionen oder Sterblichkeit. Kommt es zu Blutungen durch zufällige Störungen der V. femoralis oder andere Schiffe, unter leichten Druck mit einem sterilen Wattestäbchen oder Mull auf der Website von Blutungen angewendet werden sollte, bis die Blutung aufhört. Tiere mit Anzeichen einer Infektion sollte mit Antiinfektiva behandelt werden. Tiere, die signifikante Gangrän kann beeuthanized müssen. Diese Komplikation ist häufiger bei älteren Tieren, und in einigen Stämmen, wie BALB c Mäusen 4. Darüber hinaus kann das Hinterbein Ischämie-Modell zu leichten bis mäßig starken Schmerzen. Daher sollten Analgetika wie Buprenorphin oder Carprofen verabreicht, wie für die Behandlung von Schmerz benötigt werden, entsprechend den Empfehlungen des IACUC.
Zusammenfassend haben wir eine einfache und reproduzierbare Methode zur Untersuchung PAD in einem Mausmodell der hinteren Gliedmaßen Ischämie demonstriert. Die hinteren Gliedmaßen Ischämie-Modell mit Laser-Doppler-Imaging-Analyse ist ein ausgezeichnetes System zur Untersuchung von Gefäßerkrankungen und für die Beurteilung der therapeutischen Kandidaten.
Die Autoren danken Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, PhD, und die Stanford Small Animal Imaging Core für die technische Unterstützung. Die Autoren danken AM Bickford, Inc. für die Unterstützung der tierärztlichen Einrichtungen. Diese Arbeit wurde durch Forschungsstipendien der National Institutes of Health (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), der California Tobacco Related Disease Research Program der University of California (15IT-0257 und 1514RT-0169) unterstützt und das California Institute for Regenerative Medicine (RS1-00183). NH wird durch ein Stipendium der American Heart Association unterstützt.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Surgical Tools | Tool | Fine Science Tools | ||
Constix Cotton Swabs | Tool | Contec | SC-4 | |
Betadine (Povidone-iodine) | Reagent | PDI | ||
70% alcohol | Reagent | Kendall | ||
Phosphate Buffered Saline | Reagent | Invitrogen | ||
7-0 silk suture | Tool | Genzyme | ||
5-0 vicryl suture | Tool | Ethicon | ||
Electric shaver | Tool | GE | ||
Cautery | Tool | Baxter | ||
Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System | Equipment | Perimed |